[发明专利]一种驯化裂殖壶菌产油脂的方法

说明书

本发明公开了一种驯化裂殖壶菌产油脂的方法，包括如下步骤：(1)将保存在甘油管中的裂殖壶菌接种至种子培养基中培养，获得一级种子；(2)将上述一级种子接种至种子培养基中培养，获得二级种子；(3)将上述二级种子接种至葡萄糖的含量为25～185g/L的第一级高糖驯化培养基中进行驯化培养获得第一代后，进行连续传代的驯化培养，每驯化培养9～11代，接种至葡萄糖的含量高28～32g/L的下一级高糖驯化培养基中继续进行连续传代的驯化培养，直至葡萄糖的含量达到85～215g/L，再进行连续驯化培养9～11代，获得高糖驯化菌株；(4)将上述高糖驯化菌株接种至发酵罐中的发酵培养基扩大培养，期间分析不同时期内的油脂组分。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种驯化裂殖壶菌产油脂的方法。

背景技术

多不饱和脂肪酸是构成生物膜组分不可缺少的物质，影响着细胞的结构和功能。维持ω-6系列和ω-3系列多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated Fatty Acids，PUFAs)均衡在保护生物膜结构、避免肥胖、抗氧化、增强免疫力等方面具备十分显著的作用(扬州：扬州大学，2012；Pharmacological Research，2008，57(6)：451-455)。缺乏ω-3系列多不饱和脂肪酸会导致大脑和视网膜磷脂外层中DHA的流失，从而被ω-6系列多不饱和脂肪酸所代替，引起学龄前幼儿大脑发育减缓和视力下降(OCL-Oleagineux Corps Gras Lipides，2011，18(6)：307-313)。此外，ω-3系列多不饱和脂肪酸通过对花生四烯酸(ArachidonicAcid，ARA)代谢产生抑制作用和清除代谢中产生的花生四烯酸，消除炎症(Springer BerlinHeidelberg，1987，29(11)：167-173)。

裂殖壶菌生长速度快，油脂含量高(15％以上)，其DHA含量高(45％以上)且无毒副作用，易于提取，是生产多不饱和脂肪酸的理想途径。裂殖壶菌作为高产油脂的微生物，被认为产DHA和EPA的理想工业菌株，但是其合成多不饱和脂肪酸的途径仍不清晰，处于探究阶段(Frontiers in BioengineeringBiotechnology，2015，3：158)。基因工程技术是提升菌株性能的技术，但其结果的不可控性和人们对安全性的担忧，阻碍了基因工程技术改良菌株的发展。培养基优化可以提升工业生产的效率，但提升空间有限，不能根本上提升菌株性能。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种驯化裂殖壶菌产油脂的方法。

本发明的技术方案如下：

一种驯化裂殖壶菌产油脂的方法，包括如下步骤：

(1)将保存在甘油管中的裂殖壶菌以2～10％的接种量接种至pH为6.4～6.6的新鲜的种子培养基中，于温度27～29℃及转速180～220rpm的条件下培养45～50h，获得一级种子；

(2)将上述一级种子以4～6％的接种量接种至pH为6.4～6.6的新鲜的种子培养基中，于温度27～29℃及转速180～220rpm的条件下培养45～50h，获得二级种子；

(3)将上述二级种子接种至pH为6.4～6.6且葡萄糖的含量为25～185g/L的第一级高糖驯化培养基中进行驯化培养获得第一代后，进行连续传代的驯化培养，每驯化培养9～11代，接种至葡萄糖的含量高28～32g/L且pH为6.4～6.6的下一级高糖驯化培养基中继续进行连续传代的驯化培养，直至葡萄糖的含量达到85～215g/L，再进行连续驯化培养9～11代，获得高糖驯化菌株；

该步骤中各培养的条件如下：接种量为2～10％，培养温度为27～29℃，转速180～220rpm，培养时间为45～50h；各上述高糖驯化培养基由上述种子培养基添加葡萄糖而成；

(4)将上述高糖驯化菌株接种至发酵罐中的发酵培养基扩大培养10～12d，期间分析不同时期内的油脂组分。