[发明专利]一种制备固定化的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的方法在审
| 申请号： | 201811609654.9 | 申请日： | 2018-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN109913438A | 公开（公告）日： | 2019-06-21 |
| 发明（设计）人： | 佟毅;王靖;王智;郑璐;王小艳;陈博;李义;李文杰 | 申请（专利权）人： | 吉林中粮生化有限公司;吉林大学;中粮营养健康研究院有限公司;中粮生物化学（安徽）股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/90 | 分类号： | C12N9/90;C12N11/14 |
| 代理公司： | 北京润平知识产权代理有限公司 11283 | 代理人： | 王崇 |
| 地址： | 130033 吉林省长*** | 国省代码： | 吉林;22 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 固定化 制备 酮糖 差向异构酶 食品加工行业 固定化效率 工业应用 沉降法 可重复 游离酶 自组装 可用 酶活 钴盐 | ||
1.一种制备固定化的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的方法，所述方法包括：
(1)将D-阿洛酮糖-3-差向异构酶溶于磷酸缓冲液中，制备得到含D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的溶液；
(2)将步骤(1)制备的所述溶液缓慢滴加到钴盐缓冲液中，静置、离心得到沉淀；以及
(3)将所述沉淀用去离子水冲洗并干燥，得到固定化的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶。
2.如权利要求1所述的方法，其中，在所述步骤(1)中，所述磷酸缓冲液的pH值为7.2～7.4；
优选地，所述磷酸缓冲液包含氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、和/或磷酸二氢钾；
优选地，所述磷酸缓冲液中，所述氯化钠的浓度为0.06～0.2mmol/mL、氯化钾的浓度为0.002～0.02mmol/mL、磷酸氢二钠的浓度为0.001～0.005mmol/mL、磷酸二氢钾的浓度为0.0007～0.002mmol/mL；
优选地，对于20mg的所述D-阿洛酮糖-3-差向异构酶，使用100～1000mL、优选100～500mL的所述磷酸缓冲液进行溶解。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中，在所述步骤(2)中，所述钴盐为选自以下中的一种或多种的含水或无水钴盐：硫酸钴、氯化钴、硝酸钴、和/或乙酸钴；
优选地，所述钴盐为七水合硫酸钴；
优选地，所述钴盐缓冲液为钴离子浓度为0.4～2mM、优选0.1～0.5mM的磷酸盐缓冲液。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，在所述步骤(2)中，所述静置在20℃～30℃下进行24～72h、优选24～48h；
优选地，所述离心以3000～8000rpm、优选3000～5000rpm，进行0.5～5min、优选1～5min。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，在所述步骤(3)中，将所述沉淀用去离子水冲洗3～5次；
优选地，所述干燥在20℃～30℃的温度下进行24～48h；
优选地，所述固定化的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶为粒径为3.0～10.0μm、优选3.0～5.0μm的纳米颗粒；
优选地，所述固定化的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶中D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的含量为8～12wt％、优选10～12wt％、进一步优选10～11.7wt％。
6.一种由权利要求1-5中任一项所述的方法制备的固定化的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶。
7.一种利用权利要求6所述的固定化的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶制备D-阿洛酮糖的方法，其中，所述方法包括：
(1)将D-果糖、CoCl2和所述固定化的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶加入Tris-HCl缓冲液中，得到反应混合物；以及
(2)使所述反应混合物在30～70℃、优选50～70℃、进一步优选55～60℃下反应5～30min、优选10～20min，然后终止反应，获得D-阿洛酮糖。
8.如权利要求7所述的方法，其中，在所述步骤(1)中，所述缓冲液的浓度为20～100mM、优选20～50mM；
优选地，所述缓冲液的pH为7.0～9.5、优选7.5～8.5、进一步优选8.0～8.5。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于吉林中粮生化有限公司;吉林大学;中粮营养健康研究院有限公司;中粮生物化学（安徽）股份有限公司，未经吉林中粮生化有限公司;吉林大学;中粮营养健康研究院有限公司;中粮生物化学（安徽）股份有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201811609654.9/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
