[发明专利]一种基于LED光源的荧光固相生物芯片检测方法

权利要求书

1.一种基于LED光源的荧光固相生物芯片检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制作生物芯片：将待测物的抗原或抗体或受体或适配体在PBS缓冲溶液中混合，点样于载体片基的反应区内，再用小牛血清封闭载体基片上没有结合点样物的活性基团；

(2)在上述生物芯片的部分反应孔内分别加入含有不同浓度梯度的检测目标物的混合标准溶液，在剩余反应孔内分别加入待测样本溶液，继续向所有反应孔中依次加入检测目标物所对应的荧光材料标记的单克隆抗体或适配体，于20～37℃中反应10～20min，洗涤液洗涤；

(3)用LED光源的荧光分析仪扫描图像，根据检测目标物的荧光强度值以及标准溶液的浓度对数制作标准曲线，采用外标曲线法定量，分别计算待测物溶液中检测目标物的含量。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述荧光材料为无机荧光材料和/或有机荧光材料，其中，所述无机荧光材料选自稀土元素、碱土金属的硫化物和铝酸盐中的一种或多种，有机荧光材料选自有机小分子荧光材料和/或有机高分子荧光材料。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述荧光材料为聚合量子点、荧光微球或者荧光纳米材料。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述荧光纳米材料为荧光材料修饰的纳米金、纳米银、以核酸杂交聚合后的纳米粒子或修饰的纳米粒子为核，利用各种显色剂包裹形成的纳米粒子聚合体。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述显色剂选自氯金酸/单宁酸体系、氯金酸/氢醌体系、硝酸银/氢醌体系。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述待测物为病毒、蛋白、基因、毒素、兽药残留、农药残留或重金属。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述PBS缓冲液的配制：用137mmol/L氯化钠、2.7mmol/L氯化钾、10mmol/L磷酸二氢钠、2mmol/L磷酸二氢钾配制pH7.4的PBS缓冲液。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述洗涤液为盐酸缓冲液、磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述待测样本溶液为临床样品、食品、环境样本，包括血样、尿液、唾液、头发、组织、乳制品、饲料、动物组织、蜂蜜、蜂皇浆、鸡蛋、水产品、蔬菜、土壤、水体。

10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待测样品溶液的制备方法为：当待测样品为液体时，取50μL～1mL于10mL EP管中，用缓冲液稀释10～100倍即得待测样品溶液；当待测样品为固体时，取粉碎样品5g，加入8mL缓冲液，混合2～5min，置50℃水浴下放置10～30min，离心5～10min，取50μL上清液，加入450μL缓冲液混匀，取50μL～500μL即得待测样品溶液。