[发明专利]一种基于LED光源的荧光固相生物芯片检测方法

说明书

一种基于LED光源的荧光固相生物芯片检测方法，包括以下步骤：将待测物的抗原或抗体或受体或适配体在PBS缓冲溶液中混合，点样于载体片基的反应区内，再用小牛血清封闭载体基片上没有结合点样物的活性基团；在生物芯片的部分反应孔内分别加入含有不同浓度梯度的检测目标物的混合标准溶液，在剩余反应孔内分别加入待测物溶液，继续向所有反应孔中依次加入检测目标物所对应的荧光材料标记的单克隆抗体或适配体反应，洗涤液洗涤；最后用LED光源的荧光分析仪扫描图像并定量计算待测物溶液中检测目标物的含量。本申请检测方法可以大大降低检测成本，适合在基层检测领域推广应用，可满足对临床样品、食品和环境样本中多指标同时进行快速定量检测的要求。

技术领域

本发明涉及一种生物芯片检测方法，尤其涉及一种低成本基于LED光源的荧光法检测待测样品中多指标残留的固相生物芯片检测方法。

背景技术

现有的生物芯片是指包被在固定载体上的高密度DNA、抗原、抗体、细胞或组织的微阵列，利用生物大分子具有特异相互识别的能力而将他们有序的排列在固相载体基片(孔板、膜、玻璃片，高聚物载体等)上，与检测样品和标记的生物分子同时反应或杂交，经过自动阅读设备可获得大量有用的生物信息。目前生物芯片检测方法主要有荧光法、化学发光法、催化显色法等。由于化学发光法和催化显色法等都需要催化底物反应进行检测，干扰因素较多，而且化学发光法需要冷CCD进行高灵敏检测，因此仪器价格昂贵，不利于在基层检测领域推广。传统的荧光法需要激光作为光源，激光光源虽然具有单色性好，方向性强，光亮度高等优点，但仪器成本同样昂贵，也不利于在基层检测领域推广。LED(LightEmitting Diode)，发光二极管，是一种能够直接将电转化为光的固态半导体器件，具有光效高、耗电少，寿命长、易控制、免维护、安全环保，是新一代固体冷光源。

目前有将LED作为光源进行检测应用在液相芯片上，但是其主要检测目的在于检测溶液中总的荧光强度。在固相芯片中，检测的是固相载体上微阵列点的荧光强度，其强度大小远远小于溶液中的荧光强度。对于固相生物芯片，如果采用LED作为光源进行检测，对荧光材料的荧光强度要求高，目前常用的荧光材料的强度太低，均达不到检测灵敏度的要求。如何将LED作为光源进行检测应用到固相芯片，并且可以确保检测效果，是该领域技术人员一直探究的问题。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的上述技术问题，本申请提供了一种在确保检测效果的基础上能够降低检测成本的基于LED光源的荧光固相生物芯片检测方法。

技术方案：本申请所述的一种基于LED光源的荧光固相生物芯片检测方法，包括以下步骤：

(1)制作生物芯片：将待测物的抗原或抗体或受体或适配体在PBS缓冲溶液中混合，点样于载体片基的反应区内，再用小牛血清封闭载体基片上没有结合点样物的活性基团；

(2)在上述生物芯片的部分反应孔内分别加入含有不同浓度梯度的检测目标物的混合标准溶液，在剩余反应孔内分别加入待测样本溶液，继续向所有反应孔中依次加入检测目标物所对应的荧光材料标记的单克隆抗体或适配体，于20～37℃中反应10～20min，洗涤液洗涤；

(3)用LED光源的荧光分析仪扫描图像，根据检测目标物的荧光强度值以及标准溶液的浓度对数制作标准曲线，采用外标曲线法定量，分别计算待测物溶液中检测目标物的含量。

步骤(1)中，所述待测物为病毒、蛋白、基因、毒素、兽药残留、农药残留或重金属。

步骤(1)中，所述载体片基为透明的多孔板、高聚物片基、膜或玻片。

其中，所述的多孔板为24孔板、48孔板、96孔板或384孔板。

步骤(1)中，所述PBS缓冲液的配制：用137mmol/L氯化钠、2.7mmol/L氯化钾、10mmol/L磷酸二氢钠、2mmol/L磷酸二氢钾配制pH 7.4的PBS缓冲液。