[发明专利]一种诱导体细胞胚直接发生的方法和应用

权利要求书

1.如下a)-d)中任一项所述的DNA片段在促进拟南芥体细胞胚直接发生中的应用；所述体细胞胚直接发生是指直接在拟南芥的子叶上生成体细胞胚；

a)SEQ ID NO.1所示的DNA片段；

b)编码SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的DNA片段；

c)SEQ ID NO.3所示的DNA片段；

d)编码SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的DNA片段。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，通过上调a)-d)中任一项所述的DNA片段的表达，以促进植物体细胞胚的直接发生。

3.如下1)-4)中任一项所述的蛋白在促进拟南芥体细胞胚直接发生中的应用；所述体细胞胚直接发生是指直接在拟南芥的子叶上生成体细胞胚；

1)氨基酸序列是SEQ ID NO.2所示的蛋白；

2)在SEQ ID NO.2所示的蛋白的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白；

3)氨基酸序列是SEQ ID NO.4所示的蛋白；

4)在SEQ ID NO.4所示的蛋白的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，通过上调1)-4)中任一项所述的蛋白的表达量和/或活性，以促进植物体细胞胚的直接发生。

5.携带权利要求1所述的DNA片段的重组表达载体、转基因细胞系或基因工程菌在促进拟南芥体细胞胚发生中的应用；所述体细胞胚直接发生是指直接在拟南芥的子叶上生成体细胞胚。

6.一种诱导体细胞胚直接发生的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将权利要求1所述的a)-d)中任一项所述的DNA片段导入到出发植株拟南芥中，筛选出转基因阳性植株后进行体细胞胚的诱导培养，直接在拟南芥的子叶上生成体细胞胚。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述诱导培养的方法为：将转基因阳性植株的种子置于含有雌二醇的1/2MS培养基上，春化处理打破休眠，春化结束后进行光照培养；种子萌发后4-6天，将幼苗移至新的含有雌二醇的1/2MS培养基上，继续培养至在幼苗的子叶上生成体细胞胚。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述1/2MS培养基中含有雌二醇的浓度为10μmol/mL。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述春化处理的条件为：4℃春化处理3天。

10.一种人工种子的生产方法，将权利要求1所述的a)-d)中任一项所述的DNA片段导入到拟南芥细胞、组织、器官或拟南芥植株中，获得体细胞胚，利用获得的体细胞胚生产人工种子。