[发明专利]一种基因合成的方法有效
| 申请号： | 201811613214.0 | 申请日： | 2018-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN111378645B | 公开（公告）日： | 2020-12-01 |
| 发明（设计）人： | 李一凡;邱蔚;戴晓慧;吴政宪 | 申请（专利权）人： | 江苏金斯瑞生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京华睿卓成知识产权代理事务所(普通合伙) 11436 | 代理人： | 程淼 |
| 地址： | 212132 江苏省镇江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因 合成 方法 | ||
1.一种多基因合成方法，所述方法包括：
(1)将待合成的多种靶基因片段中的每种靶基因片段分割成若干个单链重叠寡核苷酸序列，在每个单链重叠寡核苷酸序列端部加上修饰序列使其能够以单链形式与磁珠特异性连接，所述修饰序列包括酶切位点序列和标签序列，所述标签序列因不同的靶基因片段而不同；
(2)合成带有修饰序列的单链重叠寡核苷酸序列；
(3)使带有修饰序列的单链重叠寡核苷酸序列与磁珠特异性连接；所述磁珠上连接有标签序列的反向互补序列，所述的特异性连接是通过标签序列与其反向互补序列形成双链结构；
(4)通过酶切得到单链重叠寡核苷酸序列，再进行聚合酶链式组装，获得多种靶基因片段；
其中，所述酶切和聚合酶链式组装在油包水体系中进行。
2.权利要求1所述的方法，其中至少一个油包水体系的每个油包水体系中仅包含一个磁珠。
3.权利要求1或2的方法，其中在酶切之前加入酶切和PCA反应所需的缓冲液和试剂，并将其与油性介质混合，震荡形成油包水体系。
4.权利要求3的方法，其中与油性介质混合的液体的体积与油性介质的体积比为1:5；震荡的转速为2800rpm。
5.权利要求1或2的方法，其中每个靶基因片段两端具有通用引物。
6.权利要求1或2的方法，其中所述酶切是通过内切酶进行切割。
7.权利要求6的方法，其中所述内切酶是BspQI酶。
8.权利要求1或2的方法，其中所述的标签序列含有10-100个碱基。
9.权利要求8的方法，其中所述标签序列含有15-70个碱基。
10.权利要求8的方法，其中所述标签序列含有20-40个碱基。
11.权利要求8的方法，其中所述标签序列含有20-30个碱基。
12.权利要求1或2的方法，其中所述单链重叠寡核苷酸序列含40-150个碱基。
13.权利要求12的方法，其中所述单链重叠寡核苷酸序列含50-130个碱基。
14.权利要求12的方法，其中所述单链重叠寡核苷酸序列含60-110个碱基。
15.权利要求12的方法，其中所述单链重叠寡核苷酸序列含65-90个碱基。
16.权利要求12的方法，其中所述单链重叠寡核苷酸序列含65-80个碱基。
17.权利要求1或2的方法，其中所述单链重叠寡核苷酸序列包含的重叠碱基的数量为10-100。
18.权利要求17的方法，其中所述单链重叠寡核苷酸序列包含的重叠碱基的数量为10-70。
19.权利要求17的方法，其中所述单链重叠寡核苷酸序列包含的重叠碱基的数量为10-50。
20.权利要求17的方法，其中所述单链重叠寡核苷酸序列包含的重叠碱基的数量为10-30。
21.权利要求17的方法，其中所述单链重叠寡核苷酸序列包含的重叠碱基的数量为10-20。
22.权利要求17的方法，其中所述单链重叠寡核苷酸序列包含的重叠碱基的数量为15-16。
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