[发明专利]一种DNA组装的方法及其应用

说明书

本发明涉及一种质粒、DNA组装的方法及其应用重组菌。该质粒包含单个毗邻的IIP和IIS型限制性内切酶识别位点。该质粒综合应用IIP和IIS型限制性内切酶的特性可实现递归循环、无痕和重复序列的组装。

技术领域

本发明总地涉及生物技术领域，具体涉及一种DNA组装的方法及其应用。

背景技术

DNA组装是合成生物学和生物工程的基础使能技术。当前，DNA组装方法主要分为两类：基于限制性内切酶(Restriction endonucleases,RE)的组装策略和基于同源片段介导的组装策略。其中，基于RE的DNA组装方法是应用最广泛的组装方法。

在基于RE的DNA组装方法的发展过程中，BioBrick^TM方法(Shetty,R.P.,Endy,D.,and Knight,T.F.,Jr.(2008)Engineering BioBrick vectors from BioBrick parts,JBiol Eng 2,5.)是第一个被开发并得到实际应用的方法。此方法利用四个IIP型限制性内切酶(如EcoRI、XbaI、SpeI、PstI)进行可循环的DNA片段组装，其中两个IIP型限制性内切酶(如XbaI、SpeI)为同尾酶。

BioBrick^TM方法通过在DNA片段的5’端添加EcoRI/XbaI位点以及SpeI/PstI位点，能够实现重组载体依然保持单一性的EcoRI/XbaI位点以及SpeI/PstI位点，以达到酶和载体的可重复利用性，从而连续循环(递归)的在已组装的DNA中整合新的片段。这种递归循环的DNA组装方法，可以实现多轮的“设计-构建-检验”循环，以解决在没有充分掌握遗传、生理和代谢机制条件下的生物工程试错验证研究。特别是在代谢工程研究中，多轮的“设计-构建-检验”循环可以逐步解决关键酶筛选、代谢瓶颈去除、代谢流量优化和代谢途径重构等问题，逐步提高特定代谢物的产量、转化率和生产强度，构建高性能的工程菌，以满足工业生产的需求。