[发明专利]用于检测乳铁蛋白的ELONA适配体及其应用

权利要求书

1.用于检测乳铁蛋白的ELONA适配体，其特征在于，包括SEQ ID NO.1～2所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的用于检测乳铁蛋白的ELONA适配体，其特征在于，SEQ ID NO.1～2所示的核苷酸序列的3’端利用生物素标记。

3.一种用于检测乳铁蛋白的ELONA方法，该方法包括以下步骤：

(1)获得待测样品；

(2)将包被缓冲液加入固体支持物中过夜孵育；

(3)封闭；

(4)将核酸适配体A加入到封闭处理后的固体支持物中，反应，然后清洗；

(5)将待测样品、标准品分别加入固体支持物；并加入核酸适配体B与酶标试剂反应，然后清洗；

(6)加入显色液避光反应，最后加入终止液终止反应，并检测待测样品在450nm处的吸光值；

所述核酸适配体A的序列如SEQ ID NO.1所示；

所述核酸适配体B的序列如SEQ ID NO.2所示；。

4.根据权利要求3所述的用于检测乳铁蛋白的ELONA方法，其特征在于，步骤(2)中，所述包被缓冲液的配方如下：Na₂CO₃ 1.59g/L，NaHCO₃ 2.94g/L。

5.根据权利要求3或4所述的用于检测乳铁蛋白的ELONA方法，其特征在于，所述包被缓冲液的pH值为7.0～10.0。

6.根据权利要求3所述的用于检测乳铁蛋白的ELONA方法，其特征在于，所述核酸适配体A的浓度为100～1200nM。

7.根据权利要求3所述的基于核酸适配体的ELONA技术检测乳铁蛋白的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述的核酸适配体A与固相支持物反应的结合时间为1～30min，结合温度为4～37℃。

8.根据权利要求3所述的用于检测乳铁蛋白的ELONA方法，其特征在于，所述标准品为：乳铁蛋白。

9.根据权利要求3所述的用于检测乳铁蛋白的ELONA方法，其特征在于，所述的酶标试剂为辣根过氧化物酶-链霉亲和素，添加量为20-200μL。

10.一种用于检测乳铁蛋白的ELONA试剂盒，其特征在于，包括如下试剂：

(1)标准品：乳铁蛋白；

(2)包被缓冲液：Na₂CO₃ 1.59g/L，NaHCO₃ 2.94g/L；

(3)稀释剂：1×PBS缓冲液+1mM MgCl₂，pH 7.4；

(4)核酸适配体：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2所示，其3’端利用生物素标记；

(5)酶标试剂：辣根过氧化物酶-链霉亲和素；

(6)显色液：TMB显色液；

(7)终止液：2M的H₂SO₄；

(8)洗涤液1×PBS+0.05％Tween-20。