[发明专利]无血清纳米材料冻存剂及其制备方法、使用方法，冻存液在审
| 申请号： | 201811618902.6 | 申请日： | 2018-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN109497043A | 公开（公告）日： | 2019-03-22 |
| 发明（设计）人： | 李梓菲;栾杰;王黔;穆大力;刘春军;辛敏强;付苏 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院整形外科医院 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 张勋 |
| 地址： | 100000*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 冻存 氧化石墨烯 纳米材料 无血清 制备 血清替代物 细胞 存活率 冻存液 血清 复配 性状 复苏 保存 应用 | ||
1.一种无血清纳米材料冻存剂，其特征在于，包括DMSO、血清替代物以及氧化石墨烯组成。
2.根据权利要求1所述的无血清细胞冻存液，其特征在于，所述DMSO与所述血清替代物的体积比为1：(9-15)之间；
优选地，所述DMSO与所述血清替代物的体积比为1:10。
3.根据权利要求1所述的无血清纳米材料冻存剂，其特征在于，所述氧化石墨烯配制成浓度为1-5ug/ml的氧化石墨烯水溶液；
优选地，氧化石墨烯水溶液添加后终浓度为1-5ug/ml之间；
优选地，所述氧化石墨烯水溶液的氧化石墨烯粒径为20-200nm之间。
4.根据权利要求1所述的无血清纳米材料冻存剂，其特征在于，所述血清替代物的型号为Gibco KNOCKOUTTM血清替代物10828-028。
5.包含权利要求1-4任一项所述的无血清纳米材料冻存剂的冻存液；
优选地，所述冻存液中还包括无血清培养基构成的细胞混悬剂。
6.权利要求1-4任一项所述的无血清纳米材料冻存剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将DMSO添加到血清替代物中混匀，再添加氧化石墨烯水溶液混合均匀，4℃保存即可。
7.权利要求1-4任一项所述的无血清纳米材料冻存剂的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：
将细胞与细胞混悬剂混合均匀后，逐滴加入所述细胞冻存剂，-80℃以下冻存。
8.根据权利要求7所述的使用方法，其特征在于，细胞冻存剂加入之前先在冰水混合物中预冷；
优选地，细胞与细胞混悬剂混合均匀后，细胞的终浓度为(1-6)×106个/ml。
9.根据权利要求7所述的使用方法，其特征在于，细胞混悬剂与细胞冻存剂的体积比控制在1：(3-5)之间，优选地为1：4。
10.根据权利要求7所述的使用方法，其特征在于，冻存采用程序性降温的方式，降温速率为0.5-2℃/min之间，优选地为1℃/min。
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