[发明专利]基于磁珠法进行核酸提取的试剂盒及应用

权利要求书

1.基于磁珠法进行核酸提取的试剂盒，其特征在于，包括裂解结合液、缓冲液、洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ和洗脱液，所述裂解结合液包含以下浓度的组分：异硫氰酸胍5～8mol/L、糖原60～100mg/L、Tris-Cl 10～30mmol/L、EDTA 1～3mol/L、Triton X-100 0.2％～0.5％(v/v)和异丙醇30％～40％(v/v)，所述裂解液结合液的溶剂为无菌水。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包含消化液，所述消化液包含以下浓度的组分：Nacl 10～20mmol/L和SDS 0.01％～0.05％(w/v)，所述消化液的溶剂为无菌水。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包含浓度为0.1％～1％(v/v)的Triton X-100，所述缓冲液的溶剂为无菌水。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液Ⅰ包含以下浓度的组分：高氯酸钠0.5～2mol/L和乙醇40％～60％(v/v)，所述洗涤液Ⅰ的溶剂为无菌水；所述洗涤液Ⅱ包含浓度为40％～60％(v/v)的乙醇，所述洗涤液Ⅱ的溶剂为无菌水。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗脱液包含浓度为10～30mmol/L且pH为8的Tris-Cl，所述洗脱液的溶剂为无菌水。

6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解结合液包含以下浓度的组分：异硫氰酸胍6mol/L、糖原80mg/L、Tris-Cl 20mmol/L、EDTA 2mol/L、Triton X-100 0.5％(v/v)和异丙醇35％(v/v)，所述裂解液结合液的溶剂为无菌水；

所述消化液包含以下浓度的组分：Nacl 10mmol/L和SDS 0.03％(w/v)，所述消化液的溶剂为无菌水；

所述缓冲液包含浓度为0.2％(v/v)的Triton X-100，所述缓冲液的溶剂为无菌水；

所述洗涤液Ⅰ包含以下浓度的组分：高氯酸钠2mol/L和乙醇50％(v/v)，所述洗涤液Ⅰ的溶剂为无菌水；所述洗涤液Ⅱ包含浓度为50％(v/v)的乙醇，所述洗涤液Ⅱ的溶剂为无菌水；

所述洗脱液包含浓度为20mmol/L且pH为8的Tris-Cl，所述洗脱液的溶剂为无菌水。

7.如权利要求1～6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解结合液、缓冲液、洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ和洗脱液预分装在孔板中，试剂预分装后孔板进行分膜处理。

8.如权要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒采用预分装孔板模式，所述孔板为96孔，第1列和第7列预分装的是裂解结合液，第2列和第8列预分装的是磁珠和缓冲液，第3列和第9列预分装的是洗涤液Ⅰ，第4、5列和10、11列预分装的是洗涤液Ⅱ，第6列和第12列预分装的是洗脱液。

9.如权要求8所述的试剂盒，其特征在于，预分装的裂解结合液的体积为200μl，预分装的磁珠液的体积为20μl，预分装的缓冲液的体积为200μl，预分装的洗涤液Ⅰ的体积为500μl，预分装的洗涤液Ⅱ的体积为500μl，预分装的洗脱液的体积为100μl。

10.如权要求8所述的试剂盒在核酸提取中的应用，其特征在于，当样本为液体时，裂解结合液中加入20μl蛋白酶K和200μl样本；当样本为非液体时，将样本剪成碎块，并加入2ml消化液和200μl蛋白酶K，消化结束后即得混合液，向裂解结合液中加入200μl混合液；所述蛋白酶K的浓度为20mg/ml。