[发明专利]基于磁珠法进行核酸提取的试剂盒及应用

说明书

本发明公开了基于磁珠法进行核酸提取的试剂盒及应用，属于分子生物技术领域，试剂盒包括裂解结合液、缓冲液、洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ和洗脱液，裂解结合液包含以下浓度的组分：异硫氰酸胍5～8mol/L、糖原60～100mg/L、Tris‑Cl 10～30mmol/L、EDTA 1～3mol/L、Triton X‑100 0.2％～0.5％(v/v)和异丙醇30％～40％(v/v)，裂解液结合液的溶剂为无菌水。本发明试剂盒的中裂解结合液将裂解液与结合液合二为一，大大地增强提取效率；另外，本发明试剂盒中试剂预分装在孔板内，实现核酸自动化的磁珠法提取。

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，尤其涉及基于磁珠法进行核酸提取的试剂盒及应用。

背景技术

核酸提取的技术主要有酚-氯仿抽提法、碱抽提法和磁珠法，磁珠法中有使用96深孔板搭配Smart32核酸自动提取仪进行提取。然而这些方法均存在一些不足，如酚-氯仿抽提法能够获得较好质量的核酸，其用到的化学物质(如：氯仿、苯酚等)的毒性不可忽略，对操作人员的安全有很大威胁，而且整个提取过程耗时长。另外，现有技术没有完全实现自动化，多数是半自动化的，这给操作人员带来极大的不便。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术存在的不足，而提供基于磁珠法进行核酸提取的试剂盒及应用，本发明试剂盒的中裂解结合液将裂解液与结合液合二为一，大大地增强提取效率；另外，本发明试剂盒中试剂预分装在孔板内，实现核酸自动化的磁珠法提取。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：基于磁珠法进行核酸提取的试剂盒，其包括裂解结合液、缓冲液、洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ和洗脱液，所述裂解结合液包含以下浓度的组分：异硫氰酸胍5～8mol/L、糖原60～100mg/L、Tris-Cl10～30mmol/L、EDTA 1～3mol/L、Triton X-100 0.2％～0.5％(v/v)和异丙醇30％～40％(v/v)，所述裂解液结合液的溶剂为无菌水。

异硫氰酸胍作为蛋白变性剂，通过变性蛋白从而裂解细胞。糖原可作为核酸助沉剂。Tris-Cl溶液在裂解过程中使DNA保持稳定的二级结构。EDTA是一种能与Mg²⁺、Ca²⁺、Mn²⁺、Fe²⁺等二价金属离子结合的螯合剂，其作为核酸酶抑制剂。Triton X-100是一种非离子型表面活性剂，其能够溶解细胞内的脂质，增加细胞膜的通透性，有助于核酸的释放。本发明裂解结合液将裂解液与结合液合二为一，既能裂解细胞，又能为核酸与磁珠的结合提供合适的环境，减少了操作步骤和提高核酸提取的质量。

作为上述技术方案的改进，试剂盒还包含消化液，所述消化液包含以下浓度的组分：Nacl 10～20mmol/L和SDS 0.01％～0.05％(w/v)，所述消化液的溶剂为无菌水。

在处理干血片、口拭子等复杂样本时，需要对样本进行初步消化，有助于更好的裂解。其中，NaCl提供了一个高盐环境，有助于蛋白质变性；SDS是常用的离子型表面活性剂，可使细胞膜裂解，通过与膜蛋白疏水部分结合并使其与膜分离，高浓度的SDS还可以破坏蛋白质中的离子键和氢键等非共价键，从而改变蛋白质的构象。

作为上述技术方案的改进，所述缓冲液包含浓度为0.1％～1％(v/v)的TritonX-100，所述缓冲液的溶剂为无菌水；缓冲液有助于磁珠与磁棒更好的结合。

作为上述技术方案的改进，所述洗涤液Ⅰ包含以下浓度的组分：高氯酸钠0.5～2mol/L和乙醇40％～60％(v/v)，所述洗涤液Ⅰ的溶剂为无菌水；所述洗涤液Ⅱ包含浓度为40％～60％(v/v)的乙醇，所述洗涤液Ⅱ的溶剂为无菌水。

洗涤液Ⅰ可以洗去沾在核酸表面的蛋白质，其中高氯酸钠为强氧化剂，也是高离液盐，能有效洗去蛋白质。洗涤液Ⅱ洗去沾在核酸表面的盐离子。