[发明专利]一种快速制备单分子光学图谱标记文库的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种快速制备单分子光学图谱标记文库的方法，包括以下步骤：

(1)提取长片段基因组DNA；

(2)标记提取的基因组DNA；

(3)纯化标记的基因组DNA，和

(4)将基因组DNA的骨架染色，获得单分子光学图谱标记文库。

2.权利要求1所述的方法，其中步骤(1)进一步包括以下子步骤：

a)向样品中加入裂解液和蛋白酶K，使细胞裂解并释放基因组DNA；

b)向步骤a)的反应体系中加入沉淀剂，获得基因组DNA的沉淀；

c)用清洗液洗涤所得的基因组DNA的沉淀；

d)用溶解液溶解基因组DNA。

3.权利要求1或2所述的方法，其中步骤(1)在单反应管中进行。

4.权利要求2所述的方法，其中所述裂解液包含NaCl、Tris-HCl、EDTA和SDS。

5.权利要求4所述的方法，其中所述SDS的浓度为0.1％-8％。

6.权利要求2所述的方法，其中所述裂解液包含RNase A。

7.权利要求2所述的方法，其中所述蛋白酶K的浓度为0.005-4mg/ml。

8.权利要求2所述的方法，其中所述沉淀剂包含至少一种无机盐和至少一种醇类。

9.权利要求2所述的方法，其中所述清洗液包含70％乙醇。

10.权利要求2所述的方法，其中所述溶解液选自去离子水、Tris-HCl和TE缓冲液。

11.权利要求1所述的方法，其中步骤(2)包括在标记酶存在下，将染料与步骤(1)提取的基因组DNA一起孵育。

12.权利要求11所述的方法，其中所述标记酶是限制性切刻酶或甲基化转移酶。

13.权利要求11所述的方法，其中所述染料选自BODIPY、FITC、罗丹明、香豆素、呫吨、花青素、芘和酞菁。

14.权利要求1所述的方法，其中步骤(3)包括用高温失活法或蛋白酶K消化法去除多余的标记酶；并用沉淀法或透析法去除多余的染料。

15.权利要求1所述的方法，其中步骤(4)使用的染料是YOYO-1或DAPI染料。

16.权利要求1所述的方法，其中所述单分子光学图谱标记文库适用于BioNanoGenomics公司的Irys或Saphyr平台。

17.一种快速制备单分子光学图谱标记文库的试剂盒，用于提取长片段基因组DNA的试剂、标记酶、至少两种染料和任选的蛋白酶K。

18.权利要求17所述的试剂盒，其中所述用于提取长片段基因组DNA的试剂进一步包含裂解液、蛋白酶K、任选的RNase A、沉淀剂、清洗液和溶解液。

19.权利要求18所述的试剂盒，其中所述裂解液包含NaCl、Tris-HCl、EDTA和SDS。

20.权利要求19所述的试剂盒，其中所述SDS的浓度为0.1％-8％。

21.权利要求18所述的试剂盒，其中所述蛋白酶K的浓度为0.005-4mg/ml。