[发明专利]一种利用毛细管电泳荧光SSR指纹图谱鉴别白蜡新品种金箭的方法

说明书

本发明公开了一种利用毛细管电泳荧光SSR指纹图谱鉴别白蜡新品种‘金箭’的方法，是由白蜡幼嫩叶片提取白蜡基因组DNA，并以提取的DNA为模板，利用筛选出的SSR引物对进行PCR扩增，将PCR扩增产物进行毛细管电泳，根据电泳结果中每对SSR引物的峰值，组合形成白蜡新品种‘金箭’的SSR指纹图谱，实现对白蜡新品种‘金箭’的鉴别。本发明方法中利用筛出特异性稳定、多态性好的6对SSR特异引物，构建了白蜡新品种‘金箭’的指纹图谱，能够简便、快速、准确地完成白蜡新品种‘金箭’样品的鉴定。

技术领域

本发明属于植物品种分子鉴定技术领域，具体而言，涉及一种利用毛细管电泳荧光SSR指纹图谱鉴别白蜡新品种‘金箭’的方法。

背景技术

白蜡属植物为风媒花，混栽时很容易发生天然授粉杂交，尤其是绒毛白蜡(F.velutina)、红枔(F.pennsylvanica)、白枔(F.americana)等同为枔亚属样组，其形态特征非常相似，亲缘关系极为亲近，杂交后代传统的方法往往无法区分。以往在区分种苗时都是采用宏观遗传分析生物学特性和形态特征指标，但难以区分形态极为相似或亲缘关系极近的种苗，尤其是种内不同水平的良种更是无法识别，以致生产中出现混种、混系、混株，以假乱真的情况，其结果给生产带来了极大损失。在分子水平上对种质进行鉴定不受环境和生长阶段的影响，结果稳定，可靠性强。因此，寻求从分子水平真正准确识别白蜡良种极具现实意义。

简单重复序列(Simple5equencerepeat,SSR)分子标记具有信息含量高、共显性遗传、数量丰富、分析方法简单、结果重复性好、省时省力省钱等优点，目前SSR标记是种质鉴定方面最灵敏、最可靠的一种分子标记。而利用毛细管电泳荧光SSR分子标记技术，开发基于毛细管电泳荧光SSR指纹图谱鉴别某些形态特征相似，亲缘关系亲近植物品种的方法的虽有应用于玉米、水稻、大豆、小麦、棉花等作物中的报道，但应用于林木尤其是白蜡的相关报道并不多见。

白蜡新品种‘金箭’为绒毛白蜡(FraxinusVelutina‘jinjian’)雄株，是由山东省林业科学研究院课题组培育的，2016年通过国家审定。该品种干形较直，耐盐碱，多年生，枝干黄色，当年生枝黄绿色，叶片革质且有光泽，适应范围广。但是在苗期的‘金箭’很难通过表型特征来进行鉴定，给操作者带来麻烦或对生产造成损失。因此，为了快速鉴定白蜡新品种‘金箭’，开发一种利用毛细管电泳荧光SSR指纹图谱鉴别白蜡新品种‘金箭’的方法具有重要意义。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是供用一种利用毛细管电泳荧光SSR指纹图谱鉴别白蜡新品种‘金箭’的方法。

本发明所述利用毛细管电泳荧光SSR指纹图谱鉴别白蜡新品种‘金箭’的方法，步骤是：

(1)由白蜡幼嫩叶片提取白蜡基因组DNA；

(2)以提取的DNA为模板，利用筛选出的SSR引物对进行PCR扩增；

(3)将PCR扩增产物进行毛细管电泳；

(4)根据电泳结果中每对SSR引物的峰值，组合形成白蜡新品种‘金箭’的SSR指纹图谱，实现对白蜡新品种‘金箭’的鉴别；

其特征是：

步骤(1)中DNA的提取采用CTAB法，提取缓冲液中加入2％β-巯基乙醇和2％PVP；紫外分光光度法测定DNA的浓度和纯度，稀释至30ng·μl^-1，-20℃保存，备用；