[发明专利]一种驴源犬瘟热病毒免疫球蛋白G的制备方法有效
申请号: | 201811623438.X | 申请日: | 2018-12-28 |
公开(公告)号: | CN109467600B | 公开(公告)日: | 2021-11-02 |
发明(设计)人: | 仲飞;崔丹;霍珊珊;张建楼;左玉柱;吴峰洋;郑志强;李妍;马玉忠 | 申请(专利权)人: | 河北农业大学 |
主分类号: | C07K16/10 | 分类号: | C07K16/10 |
代理公司: | 石家庄国为知识产权事务所 13120 | 代理人: | 郝伟 |
地址: | 071001 河北*** | 国省代码: | 河北;13 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 驴源犬瘟热 病毒 免疫球蛋白 制备 方法 | ||
1.一种驴源犬瘟热病毒免疫球蛋白G的制备方法,其特征在于,具体包括如下步骤:
步骤a、对青年健康驴用犬瘟热灭活疫苗接种免疫,当血液中抗体滴度达到1:10000以上、中和抗体效价达到1:256以上时,静脉采血,分离血清;所述犬瘟热灭活疫苗的毒株为CDV-L强毒株;所述犬瘟热灭活疫苗为40%v/v甲醛灭活苗;对青年健康驴接种犬瘟热灭活疫苗的操作为,通过颈部肌肉注射接种三次,相邻两次接种间隔一周,第一次接种用3mL、5×105 TCID50/mL灭活苗,后两次接种用6mL、5×105 TCID50/mL灭活苗;
步骤b、将所述血清与等体积的PBS混合,用饱和硫酸铵溶液盐析,用凝胶层析柱脱盐,用DEAE纤维素柱层析纯化,再次用饱和硫酸铵溶液盐析,用凝胶层析柱脱盐,过滤除菌,即得;其中,所述PBS与所述饱和硫酸铵溶液中均含有0.05~0.1M尿素。
2.根据权利要求1所述的驴源犬瘟热病毒免疫球蛋白G的制备方法,其特征在于,步骤a中所述青年健康驴年龄为3.5~4.5岁,体重为250~350kg。
3.根据权利要求1所述的驴源犬瘟热病毒免疫球蛋白G的制备方法,其特征在于,步骤a中所述青年健康驴为马传贫病毒和鼻疽菌阴性。
4.根据权利要求1所述的驴源犬瘟热病毒免疫球蛋白G的制备方法,其特征在于,步骤b中用孔径为0.2μm的滤膜过滤除菌。
5.一种犬瘟热病毒免疫球蛋白G溶液,其特征在于,所述溶液中的所述免疫球蛋白G按权利要求1~4任一项所述制备方法制备所得。
6.根据权利要求5所述的犬瘟热病毒免疫球蛋白G溶液,其特征在于,所述溶液的溶剂为含有0.05~0.1M尿素的生理盐水或含有0.05~0.1M尿素的PBS,所述免疫球蛋白G的浓度为50~60mg/mL。
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