[发明专利]一种驴源犬瘟热病毒免疫球蛋白G的制备方法

说明书

本发明涉及病毒抗体制备技术领域，尤其涉及一种驴源犬瘟热病毒免疫球蛋白G的制备方法。该制备方法包括如下操作：对青年健康驴用犬瘟热灭活疫苗接种免疫，每次免疫后检测抗体滴度和中和抗体效价，当抗体滴度达到1:10000以上、中和抗体效价达到1:256以上时，静脉采血，分离血清，提取、纯化免疫球蛋白G。该方法制备所得的免疫球蛋白G可用于临床治疗犬瘟热病毒病，有效率可达100％，治愈率可达85％以上，解决了犬瘟热病毒抗血清或抗体来源不足的问题。

技术领域

本发明涉及病毒抗体制备技术领域，尤其涉及一种驴源犬瘟热病毒免疫球蛋白G的制备方法。

背景技术

犬瘟热(canine distemper)是由犬瘟热病毒(canine distemper virus，CDV)引起的犬科、鼬科和浣熊科等动物的一种急性、高度接触性传染病。临床上以双相体温升高、随后支气管炎、卡他性肺炎、严重胃肠炎和神经症状为特征。犬瘟热病毒的宿主动物较广，在自然条件下不仅感染不同年龄、性别及品种的犬，同时还感染鼬科、浣熊科及大熊猫科等多种动物(如大熊猫，虎，狮，小熊猫，猞猁，熊，狼等)；同时，犬瘟热的发病率和死亡率较高，未经免疫的10月龄以下的幼犬发病率达80％以上，特别是2-5月龄的幼犬发病率和死亡率最高，死亡率高达90％以上。犬瘟热流行不仅对宠物饲养业、毛皮动物养殖业和野生动物保护业造成巨大的经济损伤，同时也给宠物主人造成一定的精神压力。所以有效防治犬瘟热不仅具有重要的经济价值，也具有重要的社会效益。

目前，犬瘟热的防治主要通过注射疫苗对其进行预防，然而由于疫苗质量、个体对疫苗免疫应答能力及母源抗体干扰等原因，使得免疫后的幼犬不能得到100％的保护，所以在宠物临床上，犬瘟热病已成为宠物临床上常见的传染病。目前治疗犬瘟热的主要方法有：抗血清(抗体)疗法、中药辅助疗法及防止继发细菌感染的抗生素辅助疗法等。

中药治疗主要是针对临床症状进行的一种辅助治疗；抗生素治疗则是一种预防细菌继发感染的辅助治疗。抗血清或抗体治疗是针对犬瘟热病毒进行的一种特异性治疗，在犬瘟热的治疗上占有主要地位。目前治疗用的抗血清或抗体主要来源于犬同种动物犬，但由于犬源不足，同时绝大多数犬分散在养犬用户中，有限的养犬厂制备的抗血清和抗体不能满足临床需要，同时制备成本较高，严重影响犬瘟热抗血清和抗体在临床上的应用。

发明内容

针对现有技术中治疗犬瘟热的抗血清或抗体主要来源于犬，但犬源不足的问题，本发明提供一种一种驴源犬瘟热病毒免疫球蛋白G的制备方法。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下技术方案：

一种驴源犬瘟热病毒免疫球蛋白G的制备方法，具体包括如下步骤：

步骤a、对青年健康驴用犬瘟热灭活疫苗接种免疫，当血液中抗体滴度达到1:10000以上、中和抗体效价达到1:256以上时，静脉采血，分离血清；

步骤b、将所述血清与等体积的PBS混合，用饱和硫酸铵溶液盐析，用凝胶层析柱脱盐，用DEAE纤维素柱层析纯化，再次用饱和硫酸铵溶液盐析，用凝胶层析柱脱盐，过滤除菌，即得；其中，所述PBS与所述饱和硫酸铵溶液中均含有0.05～0.1M尿素。