[发明专利]具有磷脂酶C活性的多肽及其用途

权利要求书

1.具有磷脂酶C活性的多肽，所述多肽具有：

1)包含在一个或多个位置发生氨基酸取代的SEQ ID No:2所示的氨基酸序列，其中所述一个或多个位置选自SEQ ID No:2所示的氨基酸序列中第6位、第8位、第10位、第104位、第205位或其任意组合；优选地，SEQ ID No:2所示的氨基酸序列中第6位、第8位、第10位、第104位和第205位全部发生氨基酸取代；或

2)与1)至少80％，优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少95％，更优选至少97％，更优选至少98％，更优选至少99％的序列同一性，且第6位、第8位、第10位、第104位、第205位的至少1个位置与SEQ ID No:2所示的氨基酸序列中第6位、第8位、第10位、第104位、第205位不同。

2.如权利要求1所述的多肽，其中

SEQ ID No:2所示的氨基酸序列的第6位的氨基酸取代为脯氨酸、甘氨酸、羟脯氨酸、丝氨酸或苏氨酸取代赖氨酸，优选脯氨酸取代赖氨酸，和/或

第8位的氨基酸取代为异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸或正亮氨酸取代赖氨酸，优选异亮氨酸取代赖氨酸，和/或

第10位的氨基酸取代为苏氨酸或丝氨酸取代甘氨酸，优选苏氨酸取代甘氨酸，和/或

第104位的氨基酸取代为甘氨酸或脯氨酸取代赖氨酸，优选甘氨酸取代赖氨酸，和/或

第205位的氨基酸取代为酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、或苏氨酸取代丝氨酸，优选酪氨酸取代丝氨酸；

优选地，所述多肽的氨基酸序列包含如SEQ ID No:4所示的氨基酸序列或由如SEQ IDNo:4所示的氨基酸序列组成。

3.分离的多肽，其中，所述多肽与SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列具有至少80％，优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少95％，更优选至少97％，更优选至少98％，更优选至少99％的序列同一性，并且所述分离的多肽在对应于SEQ ID NO:4的第6位、第8位、第10位、第104位和第205位上的氨基酸残基分别是脯氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、甘氨酸和酪氨酸，优选的，所述多肽获得自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

4.编码权利要求1-3中任一项所述的多肽的核酸分子，优选地，所述核酸分子包含如SEQ ID No:3所示的核酸序列或者所述核酸分子的序列如SEQ ID No:3所示。

5.包含权利要求4所述的核酸分子的载体，优选地，所述载体为表达载体，更优选地，所述载体被设计用于真核细胞或原核细胞中表达，尤其优选地，用于细菌细胞、真菌细胞、酵母细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞或植物细胞中表达。

6.包含权利要求4所述的核酸分子或权利要求5所述的载体的细胞，优选为真核细胞或原核细胞，更优选为细菌细胞、真菌细胞、酵母细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞或植物细胞。

7.使用权利要求6所述的细胞产生的磷脂酶C。

8.如权利要求1-3中任一项所述的多肽、或权利要求4所述的核酸分子编码的多肽、或权利要求5所述的载体编码的多肽、或权利要求6所述的细胞表达的发酵液、浓缩液或多肽、或权利要求7所述的磷脂酶C作为磷脂酶C的用途，优选为在油脂脱胶工艺中的用途。

9.酶组合物，其包括权利要求1-3中任一项所述的多肽或权利要求4所述的核酸分子编码的多肽、或权利要求5所述的载体编码的多肽、或权利要求6所述的细胞表达的多肽、或权利要求7所述的磷脂酶C以及至少一种脱胶酶；优选地，所述至少一种脱胶酶选自：磷脂酶A₁、磷脂酶A₂、磷脂酶B、磷脂酶D、果胶酶和甘露聚糖酶。

10.如权利要求1-3中任一项所述的多肽、或如权利要求4所述的核酸分子、或如权利要求5所述的载体、或如权利要求6所述的细胞、或如权利要求9所述的酶组合物在制备脱胶酶中的用途。