[发明专利]一种补肾舒脊的中药组合物的质量检测方法及其应用

权利要求书

1.一种补肾舒脊的中药组合物的质量检测方法，其特征在于，所述中药组合物包括如下重量份的原料药组成：骨碎补8-12份、狗脊4-8份、杜仲4-8份、桂枝4-8份、鹿角2-6份、延胡索5-9份、续断5-9份、秦艽5-9份、青风藤7-11份和羌活4-8份；

所述中药组合物的质量检测方法包括如下含量测定步骤：

A、柚皮苷的含量测定

供试品溶液的制备：取所述中药组合物，加入甲醇溶液，超声提取，过滤，滤液蒸干，加水溶解，柱层析提纯，收集洗脱液蒸干，加甲醇溶液溶解定容，得供试品溶液；

对照品溶液的制备：取柚皮苷对照品，加入有机溶剂制成对照品溶液；

色谱条件与系统适用性试验：

所述色谱条件与系统适用性试验的具体方法为：照高效液相色谱法测定，以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按照流动相A：流动相B的体积比为90%：10%；检测波长为283nm；理论塔板数按柚皮苷计算应不低于2000；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定并计算。

2.根据权利要求1所述的中药组合物的质量检测方法，其特征在于，在所述柚皮苷的含量测定中，所述供试品溶液制备的具体方法为：取所述中药组合物，精密称定，精密加入70-100vt%甲醇溶液10-100ml，超声处理0.1-1.0h，取出，放冷，再称定重量，用70-100vt%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液5-50ml，蒸干，残渣加水1-10ml，溶解，放冷，过聚酰胺色谱柱，以10-100ml水液洗脱，弃去水液，再用甲醇10-100ml洗脱，收集洗脱液蒸干，再用甲醇定容至1-50ml，摇匀，滤过，即得。

3.根据权利要求1或2所述的中药组合物的质量检测方法，其特征在于，所述中药组合物的质量检测方法还包括如下含量测定方法或鉴别方法中的至少一种：

B、青藤碱的含量测定

供试品溶液的制备：取适量所述中药组合物，精密称定，精密加入体积浓度40-95%乙醇溶液10-50ml，超声处理0.1-1.0h，放冷，用体积浓度为40-95%乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

对照品溶液的制备：取青藤碱对照品适量，精密称定，加体积浓度50-100%甲醇溶液制成青藤碱对照品溶液，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以pH 9.0的磷酸盐缓冲液为流动相B，流动相A：流动相B的体积比为25-40%：75-60%；检测波长为240-280nm；理论塔板数按青藤碱计算应不低于1500；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-20μl，注入液相色谱仪，测定并计算；或

C、延胡索的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物0.5-4g，加体积浓度90-100%的甲醇溶液30-80ml，超声处理15-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5-20ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取1-5次，每次5-20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加体积浓度90-100%的甲醇1-3ml使溶解，即得；

对照品药材溶液和对照品溶液的制备：取延胡索对照药材0.2-2g，加体积浓度90-100%的甲醇溶液30-80ml，超声处理15-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5-20ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取1-5次，每次5-20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加体积浓度90-100%的甲醇1-3ml使溶解，即得对照药材溶液，另取延胡索乙素对照品，加体积浓度90-100%甲醇溶液制成每1ml含0.1-1mg胡索乙素对照品的溶液，即得对照品溶液；

鉴别：照薄层色谱法试验，分别精密吸取上述对照品药材溶液、对照品溶液和供试品溶液各1-10μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以浓氨水饱和的体积比为5-15︰1-5的甲苯-丙酮为展开剂，展开，然后取出，晾干，置碘缸中1-5分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯（365nm）下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；或

D、秦艽的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物0.5-4g，加体积浓度90-100％甲醇溶液5-30ml，超声处理10-60分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取龙胆苦苷对照品，加体积浓度90-100％甲醇制成每1ml含0.2-2mg龙胆苦苷对照品的溶液，即得对照品溶液；

鉴别：照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1-10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为5-20︰1-5︰0.5-2的乙酸乙酯-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；或

E、秦艽的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物0.5-4g，加体积浓度90-100％甲醇溶液5-30ml，超声处理10-60分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取栎瘿酸对照品，加体积浓度90-100％三氯甲烷溶液制成每1ml含0.2-2mg的溶液，即得对照品溶液；

鉴别：照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液5-20μ1和对照品溶液1-5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40-60︰0.5-2︰0.2-1的二氯甲烷-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12vt％硫酸乙醇溶液，在102-108℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；或

F、羌活的鉴别：

供试品溶液的制备：取所述中药组合物0.5-4g，加体积浓度90-100％甲醇溶液5-30ml，超声处理10-60分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取紫花前胡苷对照品，加体积浓度90-100％甲醇溶液制成每1ml含0.2-2mg紫花前胡苷对照品的溶液，即得对照品溶液；

鉴别：照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1-10μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5-10：1-3的二氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。