[发明专利]一种动物体内药物残留的检测方法

权利要求书

1.一种动物体内药物残留的检测方法，其特征在于，以动物尿液作为检测对象，具体包括如下步骤：

1)样品前处理：

量取样品放置于塑料离心管中，加入提取液后，涡旋振荡、离心，收集上清液；

将所述上清液过Prime HLB固相萃取柱净化、浓缩、定容后，备用；

2)定性分析：

运用UPLC-MS/MS-Qtrap法对经过样品前处理的待检测动物尿液样品进行筛查，采用液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的增强子离子扫描功能，建立MRM-IDA-EPI筛查方法，获得待检测动物尿液样品中各目标药物母离子的MS²谱图；

用已知数据库中各药物的标准MS²谱图与获得待检测动物尿液样品中各目标药物母离子的MS²谱图分别进行对比，获得相似度值，并匹配两者的特征碎片离子，进而判断待检测动物尿液样品中是否含有目标药物；

3)定量分析：

分别称取各药物标准品，依据相似相溶原理选择溶剂分别配制1mg/mL的标准储备液，备用；

按照步骤1)中样品前处理方法对空白样品进行处理后，用空白样品基质溶液稀释标准储备液，制成混合标准储备溶液；

将混合标准储备溶液定容后，配制浓度为0.5ng/mL～100ng/mL的系列基质匹配标准工作溶液；

运用UPLC-MS/MS-Qtrap法，采用液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪对系列匹配标准工作溶液和经过样品前处理的待检测动物尿液样品分别进行测定，获得以浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标的绘制标准曲线，以此标准曲线来计算待检测动物尿液样品中目标药物的残留量；

所述提取液为含有甲酸的乙腈与甲醇的混合溶液，其中，乙腈与甲醇的体积比为1:1，且甲酸的体积浓度为0.2％；

所述药物为阿苯哒唑、噻苯哒唑、奥芬达唑、依诺沙星、洛美沙星、司帕沙星、奥比沙星、氟罗沙星、吡哌酸、萘啶酸、西诺沙星、恩诺沙星、氟甲喹、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、二氟沙星、噁喹酸、沙拉沙星、达氟沙星、培氟沙星、磺胺甲二唑、磺胺苯酰、磺胺吡唑、磺胺苯吡唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺异恶唑、磺胺噻唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺喹噁啉、磺胺嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺多辛、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺吡啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺醋酰、甲氧苄啶、林可霉素、替米考星、吉他霉素、交沙霉素、土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝哒唑、羟基甲硝唑、羟甲基甲硝咪唑、替硝唑、奥硝唑、甲苯咪唑、群勃龙、甲基睾丸酮、安宫黄体酮、地塞米松、甲基强的松龙、地夫可特、更昔洛韦、阿昔洛韦、金刚烷胺、利巴韦林、阿比多尔、咪喹莫特、克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林、莱克多巴胺、西马特罗、喷布特罗、苯唑西林、氨苄青霉素、氯唑西林、双氯西林、青霉素G、头孢氨苄、地西泮、氯丙嗪、氯羟吡啶以及3-甲基喹噁啉-2-羧酸；

所述步骤1)中样品前处理具体为：

量取样品2.00mL，置于塑料离心管中，加入提取液6mL，液涡旋振荡提取，6000r/min离心5min，收集上清液；

将上清液直接过Prime HLB固相萃取柱净化，取4mL流出液在40℃条件下氮吹至近干，加入1.0mL 20％的甲醇水溶液定容后，过0.22um微孔滤膜，备用；

所述步骤2)中液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的质谱条件为：

离子源：电喷雾离子源；

扫描模式：正离子扫描；

采集模式：多反应监测；

信息关联扫描：强度阈值100cps；

增强子离子扫描：质量数采集范围m/z 50～1000Da；

电喷雾电压：5500V；

雾化气压力：50psi；

气帘气压力：30psi；

辅助气压力：60psi；

离子源温度：550℃；

入口电压：10V；

碰撞气能量：20、35、50V；

扩展碰撞能量：15V；

所述步骤3)中液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的色谱条件为：

色谱柱：Waters BEH C18反相色谱柱；

柱温：40℃；

进样体积：10μL；

流速：0.2mL/min；

流动相：流动相A：含0.1％甲酸的0.01mol/L乙酸铵水溶液，B：甲醇，梯度洗脱程序：0min，95％A；1min，95％A；4min，83％A；6min，83％A；12min，60％A；17min，5.0％A；20min，5.0％A；20.1min，95％A；25min，95％A；

所述步骤3)中液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的质谱条件为：

离子源：电喷雾离子源；

扫描模式：正离子扫描；

采集模式：多反应监测；

电喷雾电压：5500V；

雾化气压力：50psi；

气帘气压力：30psi；

辅助气压力：60psi；

离子源温度：550℃；

入口电压：10V。

2.根据权利要求1所述动物体内药物残留的检测方法，其特征在于，所述待检测样品为猪尿液。