[发明专利]一种通用型CAR-T细胞及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种sgRNA，所述的sgRNA是SEQ ID NO:11所示的序列。

2.根据权利要求1所述sgRNA，所述sgRNA靶向PD1基因。

3.含有权利要求1所述sgRNA的多位点编辑的PTG(Polycistronic tRNA-gRNA)，所述的PTG含有SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:11所示的序列。

4.根据权利要求3所述PTG(Polycistronic tRNA-gRNA)，所述的PTG含有SEQ ID NO:14所示的序列。

5.根据权利要求3所述PTG(Polycistronic tRNA-gRNA)，所述的PTG还含有SEQ ID NO:6所示的序列。

6.根据权利要求5所述PTG(Polycistronic tRNA-gRNA)，所述的PTG含有SEQ ID NO:15所示的序列。

7.包含权利要求1或2所述的sgRNA或权利要求3-6任一所述的PTG的载体。

8.根据权利要求7所述载体，所述的载体选自逆转录病毒、慢病毒或仙台病毒。

9.根据权利要求8所述载体，所述的载体选自慢病毒。

10.包含权利要求1-2任一所述的sgRNA、或者权利要求3-6任一所述PTG(Polycistronic tRNA-gRNA)、或者权利要求7-9任一所述载体的试剂盒。

11.权利要求1-2任一所述的sgRNA、或者权利要求3-6任一所述PTG(PolycistronictRNA-gRNA)、或者权利要求7-9任一所述载体、或者权利要求10所述试剂盒，在构建通用型CAR-T细胞中的应用。

12.根据权利要求11所述应用，所述的通用型CAR-T细胞敲除PD1基因，以及TCR基因。

13.根据权利要求12所述应用，所述的通用型CAR-T细胞同时敲除TCR，B2M和PD1基因。

14.利用权利要求1-2任一所述的sgRNA、或者权利要求3-6任一所述PTG(Polycistronic tRNA-gRNA)、或者权利要求7-9任一所述载体、或者权利要求10所述试剂盒制备的细胞。

15.一种CAR-T细胞，所述的细胞采用SEQ ID NO:15所示的序列敲除TCR 、B2M和PD1基因。

16.根据权利要求15所述的CAR-T细胞，所述CAR靶向CD19。

17.根据权利要求15所述的CAR-T细胞，所述的CAR具有SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列、或者SEQ ID NO:17所示的核酸序列。

18.权利要求15-17任一所述的CAR-T细胞制备方法，其包括以下步骤：

1)得到活化的T细胞；

2)用编码靶向CD19的CAR的慢病毒载体来转染步骤1)的T细胞，获得靶向CD19的CAR-T细胞；所述靶向CD19的CAR具有SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；

3)将步骤2)获得的CAR-T细胞采用SEQ ID NO:15所示的序列进行PD1基因， TCR和B2M基因的敲除；

其中，步骤2）和3）顺序可互换或同时进行。