[发明专利]靶向抑制miR-34a的人工环状RNA的通用表达框架、表达方法及其应用在审
申请号: | 201811634414.4 | 申请日: | 2018-12-29 |
公开(公告)号: | CN109554368A | 公开(公告)日: | 2019-04-02 |
发明(设计)人: | 张腾;罗卫峰;岳颖;赵玉晓;余卫国 | 申请(专利权)人: | 上海锐赛生物技术有限公司 |
主分类号: | C12N15/113 | 分类号: | C12N15/113;C12N15/63;A61K48/00;A61K31/7088;A61P3/04;A61P3/06;A61P3/10;A61P1/16 |
代理公司: | 上海三方专利事务所 31127 | 代理人: | 吴玮;杨懿 |
地址: | 201315 上海市浦东新*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 靶向抑制 环状RNA 通用 脂肪肝 应用 真核表达质粒 逆转录病毒 细胞内表达 腺相关病毒 高脂血症 上游序列 生物功能 下游序列 中间序列 慢病毒 腺病毒 介导 质粒 肥胖 制备 糖尿病 病毒 携带 | ||
1.一种式I序列的靶向抑制miR-34a的人工环状RNA的通用表达框架,
其中,
US为上游序列,碱基序列如SEQ ID NO.1所示,
DS为下游序列,碱基序列如SEQ ID NO.2所示,
34inh为miR-34a-5p的吸附抑制位点的序列,碱基序列如SEQ ID NO.3所示,
LS为连接序列,碱基序列如SEQ ID NO.4所示,
n个miR-34a-5p吸附位点序列通过连接序列连接并隔离,避免相邻两个吸附位点之间的干扰,n为自然数,
IS为环状RNA的鉴定序列,碱基序列如SEQ ID NO.5所示,用于环状RNA鉴定引物的结合。
2.如权利要求1所述的人工环状RNA的通用表达框架,其特征在于所述的连接序列为GTGTGT。
3.如权利要求1所述的人工环状RNA的通用表达框架,其特征在于miR-34a-5p吸附抑制位点的序列由人源miR-34a-5p的反向互补DNA序列决定,亦可模拟microRNA与靶基因结合的原则对个别碱基进行优化调整或对吸附位点碱基数进行合理调整。
4.如权利要求1所述的人工环状RNA的通用表达框架,其特征在于5≤n≤50。
5.一种靶向抑制miR-34a的人工环状RNA分子rs-ciR34-10的通用表达框架,其特征在于碱基序列如SEQ ID NO.6所示。
6.一种靶向抑制miR-34a的人工环状RNA分子rs-ciRscramble-10的通用表达框架,其特征在于碱基序列如SEQ ID NO.7所示。
7.权利要求1~6所述任一人工环状RNA的通用表达框架的表达方法,其特征在于利用真核质粒表达系统、慢病毒表达系统、腺病毒表达系统、腺相关病毒表达系统或逆转录表达系统表达。
8.一种靶向抑制miR-34a的人工环状RNA,其特征在于由权利要求1~7所述任一人工环状RNA的通用表达框架利用真核质粒表达系统、慢病毒表达系统、腺病毒表达系统、腺相关病毒表达系统或逆转录表达系统表达。
9.如权利要求1~7所述任一人工环状RNA的通用表达框架在制备肥胖、脂肪肝、高脂血症和糖尿病的药物中的应用。
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