[发明专利]核酸编码的CAR-T细胞及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种核酸编码的CAR-T细胞的制备方法，其特征在于，该方法的具体步骤为：

(1)将细胞与末端修饰有胆固醇的单链DNA混合于培养基中，孵育，得到修饰有单链DNA的细胞；所述细胞为T细胞；

(2)然后，向所述步骤(1)的体系中加入所述单链DNA的互补链DNA修饰的抗体，混合均匀，孵育，得到所述核酸编码的CAR-T细胞；所述单链DNA的互补链DNA修饰的抗体利用异-双功能基试剂实现抗体与DNA的连接；其中，所述异-双功能基试剂包括SPDP、SMCC、EMCS、GMBS中的一种或多种。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述单链DNA的序列如SEQID NO.1所示；和/或，步骤(2)中，所述互补链DNA的序列如SEQ ID NO.2所示。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述细胞包括Jurkat、kit225中的一种或两种；和/或，所述细胞与单链DNA的加入比例为：100μL 1×10⁶/mL的细胞中，加入终浓度为8μmol/L～16μmol/L的单链DNA。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述孵育的条件为37℃、5％CO₂，孵育的时间为1～2小时；和/或，步骤(2)中，所述孵育的条件为37℃、5％CO₂，孵育的时间为1～2小时。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述抗体为具有靶向识别分子的抗体，所述分子包括叶酸分子、生物素分子、肿瘤坏死因子、胆酸中的一种或多种。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述修饰有单链DNA的细胞与互补链DNA修饰的抗体的添加比例为：每100μL 1×10⁶的细胞中，抗体的加入量为10-30μg。

7.如权利要求1-6之任一项所述方法制备得到的核酸编码的CAR-T细胞。

8.如权利要求7所述的核酸编码的CAR-T细胞在制备多靶标精准定向及靶向肿瘤细胞的产品中的应用。

9.如权利要求7所述的核酸编码的CAR-T细胞在制备促进肿瘤细胞识别、杀伤的产品中的应用。

10.如权利要求7所述的核酸编码的CAR-T细胞在用于制备癌症诊疗的药物中的应用。

11.如权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述肿瘤细胞包括急性B淋巴细胞白血病细胞、前列腺癌细胞、胰腺癌细胞。

12.如权利要求11所述的应用，其特征在于，所述急性B淋巴细胞白血病细胞为K562细胞。