[发明专利]消除β2-微球蛋白检测中钩状效应的方法和试剂盒

说明书

本发明公开了一种消除β2‑微球蛋白检测中钩状效应的方法，所用的试剂包括试剂R1、试剂R2，以及校准品，所述消除β2‑微球蛋白检测中钩状效应的方法利用竞争性免疫反应，包括：在试剂R1中加入抗β2‑微球蛋白抗体，在试剂R2中加入β2‑微球蛋白致敏胶乳颗粒，校准品采用β2‑微球蛋白校准品；检测时，通过使β2‑微球蛋白与其相对应的已知浓度的β2‑微球蛋白抗体结合，再与β2‑微球蛋白致敏胶乳颗粒反应，通过测定吸光度的变化量，来确定样本中被测对象的浓度。优点是：检测准确度高、检测范围宽。本发明还公开了一种消除β2‑微球蛋白检测中钩状效应的试剂盒。

技术领域

本发明涉及生化试剂技术领域，尤其是涉及一种消除β2-微球蛋白检测中钩状效应的方法。本发明还涉及一种消除β2-微球蛋白检测中钩状效应的试剂盒。

背景技术

前带和后带早在1929年就由Heidelberger提出。他在恒定量抗体中加不同量抗原后形成的免疫复合物(IC)沉淀量的研究中，得到图1所示的关系图形。他把抛物线顶点(拐点)左右两侧，同一反应所显示的不同性状称为双相应答(biphasic response)，又把该曲线所包括的反应区域以抗原-抗体的相对比例大致分为抗体过剩区，又称前带(prozone)，两者浓度大致相等的当量区又称等价带，抗体过剩区又称后带(postzone)。在免疫学检验中，当以定量的抗原测定抗体时，若被测抗体浓度低于抗体当量浓度，形成的IC量正比于抗体浓度；大于该当量浓度后形成的IC量反而减少，抗体过量越多，形成的IC量越少，出现与图1相似的反应曲线。以往把这种现象称为前带现象。反之若以定量的抗体测定抗原时，当被测抗原浓度大于抗体的当量浓度后出现的IC量减少的情况，称为后带现象。这些命名源于经典的Heidelberger双相应答曲线，并延用很长时间直至现在。在单克隆抗体问世后，Miles等创立了放射免疫测定的双位点二步法，尔后不久又将其发展为双位点一步法。在他们测定血清铁蛋白的研究中发现，在确定的固相抗体浓度和标记抗体浓度，当被测铁蛋白浓度高达一定程度后，反应信号不再与分析物浓度成正比而转向反比关系。这种情况在一步法中尤为严重，即测定的检测范围较之二步法更窄。这种现象以后一再被许多研究者所证实，在ELISA反应中更常见。1977 年Green等根据反应曲线形状提出了钩状效应(hookeffect)的名称。因此严格地说，前带现象系指抗体过剩时反而使反应信号弱化而使信号-剂量(浓度) 曲线呈钩状的现象；后带现象是指抗原过剩时使反应信号-剂量曲线呈钩状的现象。因此钩状效应概括了前、后带现象，在命名上较为确切。因习惯使然，前带现象现仍在使用，后带现象一词并不多用，在以前文献中常与前带现象混用。目前钩状效应多指抗原过剩而言，因此又有高剂量钩状效应(high dose hook effect)一词，以别于竞争法中的低剂量钩状效应。现在前带现象与钩状效应混用的情况仍较多见，命名学上尚未统一。

钩状效应的原因曾有很多种解释。趋于认同的观点是，当抗原-抗体比例适当时，形成较完整的IC网络结构，使蛋白质分子的疏水结构充分暴露而易产生沉淀反应。反之，当两者比例失调时，将不同程度地影响IC的结构完整性，使之具有一定的溶解度或发生可逆溶解作用，即IC越不完整，更易溶解或可逆溶解。因此对于免疫沉淀反应而言，钩状效应是由于不能产生足够大的和溶解度小的IC。对于凝集反应，则因不完整的IC网络结构经摇动而发生可逆解离。对于各种标记免疫测定，则因形成可溶性IC或形成的IC易从固相载体上洗脱。在一步夹心法中过量的被测物与固相蛋白及标记蛋白争相结合，难以或不能有效地形成夹心结合物。高剂量钩状效应使强阳性标本误测为弱阳性以至假阴性结果。竞争法中的低剂量钩状效应系指分析物浓度较低时反而产生较强的反应信号，对其原因尚在研究中。对于异常值与正常值上限间距不太大的药物分析等，低剂量钩状效应可产生错误结果，一般而言其严重程度不如高剂量钩状效应。