[发明专利]一种测定花生干种子中反式白藜芦醇含量的方法

说明书

本发明提供了一种测定花生干种子中反式白藜芦醇含量的方法。该方法包括如下步骤：将花生干种子粉末置于酶解液中，酶解，再加入乙醇，混匀后，在频率为30～60kHz下超声10min～4h，离心取上清液，得花生干种子粗提液；所述酶解液为纤维素酶的水溶液，浓度为1～8g/L；使用高效液相色谱测定所述花生干种子粗提液中t‑RVT的含量。本发明提供的测定方法，优化了前处理的方法，与现有的方法对比，节省了时间和溶剂。本发明的测定方法准确性好，重复性好，是一种较快速、准确、灵敏度高的分析方法，为花生中提取t‑RVT工艺及测定花生干种子中t‑RVT含量提供参考。

技术领域

本发明涉及食品中活性物质的检测领域，更具体地，涉及一种测定花生干种子中反式白藜芦醇含量的方法。

背景技术

白藜芦醇(Resveratrol)，又称芪三酚，是一种非黄酮类多酚化合物，为白色针状晶体，分子式为C₁₄H₁₂O₃结构式为：

天然的白藜芦醇有顺式、反式两种结构，这两种结构可各与葡萄糖结合，形成顺式或反式白藜芦醇苷。

白藜芦醇苷在肠道中糖苷酶的作用下可释放出白藜芦醇，其中反式异构体的生理活性强于顺式，单体活性大于糖苷。白藜芦醇广泛存在于虎杖、花生、葡萄等植物中，随着研究的深入，其药理作用逐渐被人们发现，如抗菌、抗炎、抗癌、抗诱变、抗氧化、防治心脏病、降低血脂、抗血小板凝聚和抗血栓等，在心脑血管和癌症的防治上具有良好的应用前景，甚至在食品及保健品行业，白藜芦醇产品备受广大消费者追捧，目前也有将白藜芦醇提取物制成降脂、美容、减肥和抗癌天然保健食品及胶囊。

花生是白藜芦醇含量最高的植物之一，在自然条件下，白藜芦醇作为植物抗毒素在花生受到各种生物及非生物胁迫时大量积累。在植物体内，白藜芦醇由白藜芦醇合成酶在苯丙氨酸代谢途径中合成。目前，国内外对葡萄和虎杖的白藜芦醇研究较多，对花生中白藜芦醇含量的研究报道较少。对于前处理方法，大多采用浸提法、超声提取法等。即将原料粉碎，采用有机溶剂(如甲醇、乙醇、乙酸乙酯等)进行提取，经过滤后将滤液浓缩至干，复溶后进行液相色谱分析。由于花生种子中成分很复杂，杂质较多，目标物出峰不明显，干扰较大。因此，探索新的前处理方法，提高检测效率，为研究花生白藜芦醇合成机理及育种利用奠定基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定花生干种子中反式白藜芦醇(trans-resveratrol,t-RVT)含量的方法，该方法包括如下步骤：

将花生干种子粉末置于酶解液中，酶解，再加入乙醇，混匀后，在频率为30～60kHz下超声10min～4h，离心取上清液，得花生干种子粗提液；所述酶解液为纤维素酶的水溶液，浓度为1～8g/L；

使用高效液相色谱测定所述花生干种子粗提液中反式白藜芦醇的含量。

本发明利用酶解法联合超声技术提取花生干种子中t-RVT，该前处理方法可以有效地除去高效液相色谱测定时对t-RVT产生干扰的杂质，提高检测效率。在本发明中，优选地是测定反式白藜芦醇(t-RVT)的含量。

在本发明一个优选实施方式中，为了提高t-RVT的提取率，酶解的时间为1～3h，进一步优选为2h。

在本发明一个优选实施方式中，酶解的温度在纤维素酶的最佳酶活条件下进行。

在本发明一个优选实施方式中，酶解液由纤维素酶和超纯水配制而成。其中，酶解液的pH优选为5.0～7.0，进一步优选为5.0～5.5。为了提高t-RVT的提取率，酶解液的浓度优选为1～8g/L，更优选为2～4g/L。

在本发明一个优选实施方式中，为了减少误差，所述花生干种子粉末与所述酶解液的质量体积比为(2～4):5，优选为3:5。