[发明专利]一种检测BCR-ABL融合基因ABL激酶区突变的方法在审
| 申请号： | 201811636832.7 | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109777864A | 公开（公告）日： | 2019-05-21 |
| 发明（设计）人： | 尤隽丹;郝玮;李小青 | 申请（专利权）人： | 武汉康圣达医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12N15/11;C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;陈征 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 突变 融合基因 种检测 测序 检测 高通量检测 检测灵敏度 耐药突变 同一体系 突变基因 突变检测 剪切型 敏感度 外周血 野生型 富集 扩增 骨髓 克隆 复合 标本 封闭 | ||
1.一种检测BCR-ABL融合基因ABL激酶区突变的方法，其特征在于，从外周血或骨髓样本中提取RNA，随机引物逆转录成cDNA，再以cDNA为模板，在同一反应体系中扩增待测样品中BCR-ABL融合基因两种剪切型M-bcr和m-bcr，以扩增产物为模板，COLD-PCR扩增ABL激酶区，构建文库，文库混合制备模板后上机测序。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述在同一反应体系中扩增待测样品中BCR-ABL融合基因两种剪切型M-bcr和m-bcr的方法为：以cDNA为模板，以SEQ ID NO.1-3所示序列为引物，进行PCR扩增。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，SEQ ID NO.1、2、3所示序列的引物在PCR反应体系中初始物质的量比例为1:1:2。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，BCR-ABL融合基因扩增程序为：
95℃，10min；
95℃30s，退火温度65℃，30s，72℃75s，共20个循环，每个循环退火温度降低0.5℃；
95℃30s，55℃30s，72℃75s，共25个循环；
72℃8min。
5.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述COLD-PCR扩增ABL激酶区的方法为：以BCR-ABL融合基因的扩增产物为模板，以SEQ ID NO.3-5所示的核苷酸序列为引物，进行COLD-PCR扩增。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，COLD-PCR扩增程序为：
95℃，2min；
95℃10s，63℃30s，72℃10s，共5个循环；
95℃10s，69℃30s，73℃30s，63℃30s，72℃10s，共5个循环；其中73℃自首个循环起，每个循环升高0.2℃；
95℃10s，69℃30s，74℃30s，63℃30s，72℃10s，共45个循环；72℃5min。
7.一种检测BCR-ABL融合基因ABL激酶区突变的试剂盒，其特征在于，含有SEQ ID NO.5所述的引物。
8.一种利用权利要求1-6任一所述的方法进行工作的用于检测BCR-ABL融合基因ABL激酶区突变的试剂盒。
9.一种适用于检测BCR-ABL融合基因ABL激酶区突变的引物组合，其特征在于，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-5所示。
10.一种寡核苷酸，其特征在于，其如SEQ ID NO.5所示。
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