[发明专利]免疫捕获组合物、制备方法、试剂盒以及应用

说明书

本申请公开了一种免疫检测组合物、制备方法、试剂盒以及应用，该免疫捕获组合物包括：固相载体；至少一个第一配体，固定于固相载体表面；以及修饰于固相载体表面的至少第一封闭化合物和第二封闭化合物，第一封闭化合物和第二封闭化合物用于封闭固相载体表面的活性位点；其中，第一封闭化合物为多羟基糖类化合物或蛋白质类化合物，第二封闭化合物为多羟基糖类化合物或蛋白质类化合物，第一封闭化合物不同于第二封闭化合物。通过上述方式，本申请能够有效提高封闭效果，提高检测结果的准确性。

技术领域

本申请涉及免疫检测技术领域，特别是涉及免疫捕获组合物、制备方法、试剂盒以及应用。

背景技术

在经典的免疫分析方法中，抗原抗体之间的高亲和、特异性识别构成了分析的基础。亲和作用是特定生物分子结构下配体和受体间一系列非共价力(亲疏水作用、静电作用、氢键等)的总称，多重弱力的综合作用保证了亲和双方的稳定结合。然而，在复杂体系中存在的非目标物质可能在不同程度上对亲和配体和受体产生吸附，称为“非特异性吸附”。在实际实验操作与相关器件设计中，通常需加入封闭剂与传感界面的活性位点结合，以降低非特异性吸附，同时不干扰体系中目标亲和反应的正常进行。

本申请发明人在长期研发过程中发现，在传统免疫亲和反应中，通常由廉价易得的蛋白质作为单一封闭剂，如牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)等。但对于某些特定的项目来说，还是没有很好的封闭效果，会产生很高的背景信号，严重影响检测结果的灵敏度和特异性。

发明内容

本申请主要解决的技术问题是提供一种免疫检测组合物、制备方法、试剂盒以及应用，能够解决蛋白质作为单一封闭剂时，由于封闭效果不好，产生高背景信号，从而影响检测结果的灵敏度和特异性的问题。

为解决上述技术问题，本申请采用的一个技术方案是：提供一种免疫捕获组合物，免疫捕获组合物包括：固相载体；至少一个第一配体，固定于固相载体表面；以及修饰于固相载体表面的至少第一封闭化合物和第二封闭化合物，第一封闭化合物和第二封闭化合物用于封闭固相载体表面的活性位点；其中，第一封闭化合物为多羟基糖类化合物或蛋白质类化合物，第二封闭化合物为多羟基糖类化合物或蛋白质类化合物，第一封闭化合物不同于第二封闭化合物。

其中，免疫捕获组合物进一步包括：修饰于固相载体表面的第三封闭化合物；其中，第三封闭化合物为含有伯氨基的小分子化合物。

其中，多羟基糖类化合物为葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、葡聚糖、甘露醇或聚蔗糖中的至少一种；蛋白质类化合物为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、酪蛋白、明胶、酪蛋白水解物、免疫球蛋白、奶粉、人或动物血清中的至少一种；含有伯氨基的小分子化合物为三羟甲基氨基甲烷、乙醇胺、羟胺、己胺或甘氨酸中的至少一种。

其中，至少一个第一配体为抗体或抗原。

其中，固相载体为微孔板、玻璃片、微流控芯片、胶乳、磁性或非磁性的高分子微球、金属纳米颗粒、金属合金纳米颗粒、无机微球、无机/有机杂化微球、荧光纳米颗粒、磁珠、多功能荧光磁珠中的至少一种；金属纳米颗粒包括但不限于金纳米颗粒或银纳米颗粒。

其中，固相载体为高分子微球，高分子微球的粒径为1-10μm，高分子微球的表面具有功能基团，功能基团用于偶联至少一个第一配体；功能基团为羧基、羟基、氨基、甲苯磺酰基、氯甲基、巯基、醛基、酰肼、硅羟基、琥珀酰亚胺酯、环氧基中的至少一种。

其中，至少一个第一配体包括：第一抗体和第二抗体；其中，第一抗体和第二抗体与同种待测抗原发生特异性结合作用。

其中，第一封闭化合物和第二封闭化合物的质量之和与固相载体的质量的比值为(0.01-10):100。

其中，第一封闭化合物、第二封闭化合物以及第三封闭组合物的质量之和与固相载体的质量的比值为(0.01-10):100。