[发明专利]虎γ干扰素及其表达基因、制备方法和应用

权利要求书

1.一种虎γ干扰素，其特征在于，包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

2.一种编码权利要求1所述的虎γ干扰素的表达基因，其特征在于，所述表达基因的序列为：

A)编码权利要求1的虎γ干扰素的核苷酸序列；或者

B)与A)的核苷酸序列编码相同序列的蛋白质，但因遗传密码的简并性而与A)的核苷酸序列不同的序列；或者

C)对上述A)或B)所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失、添加修饰的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的虎γ干扰素的表达基因，其特征在于，所述A)中的核苷酸序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。

4.一种pPIC9K表达载体，其特征在于，包含权利要求2或3所述的虎γ干扰素的表达基因。

5.根据权利要求4所述的pPIC9K表达载体，其特征在于，包含SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。

6.一种重组毕赤酵母，其特征在于，包含权利要求4-5任一项所述的pPIC9K表达载体。

7.一种权利要求1所述的虎γ干扰素的制备方法，其特征在于，通过诱导虎外周淋巴细胞获得所述虎γ干扰素，或者通过基因工程生产所述虎γ干扰素。

8.根据权利要求7所述的虎γ干扰素的制备方法，其特征在于，通过诱导虎外周淋巴细胞获得所述虎γ干扰素，步骤如下：

取虎外周血，分离其中淋巴细胞，以50-150μg/mL刀豆素诱导，于CO₂培养箱中培养12-36h，使淋巴细胞分泌所述虎γ干扰素，即得；

或者

通过基因工程生产所述虎γ干扰素，步骤如下：

(1)获得虎γ干扰素的原始表达基因，去除该原始表达基因中的信号肽序列，并根据毕赤酵母的偏嗜性进行密码子优化，随后在5’端和3’端分别加上酶切位点，得到IFN-γ成熟蛋白基因片段，将上述IFN-γ成熟蛋白基因片段插入至pPIC9K表达载体中，构建重组质粒pPIC9K-IFN-γ；

(2)将上述重组质粒pPIC9K-IFN-γ转入毕赤酵母中，通过筛选得到阳性重组毕赤酵母；

(3)培养、诱导上述重组毕赤酵母表达虎γ干扰素，即得。

9.根据权利要求8所述的虎γ干扰素的制备方法，其特征在于，通过基因工程生产所述虎γ干扰素，所述步骤(1)中，所述IFN-γ成熟蛋白基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述步骤(2)中，采用内切酶NotI将重组质粒pPIC9K-IFN-γ线性化，转化至毕赤酵母感受态细胞，筛选得到阳性重组毕赤酵母；

所述步骤(3)中，所述培养的培养基为BMGY培养基；所述诱导的条件为：诱导温度为26-30℃，诱导时间为36-96h，每8-32h向培养基中加入甲醇至甲醇的终浓度为0.8-1.2％。

10.权利要求1所述的虎γ干扰素在制备用于增强虎免疫能力和/或抵抗病原微生物感染的药物中的应用。