[发明专利]虎γ干扰素及其表达基因、制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种一种虎γ干扰素及其表达基因、制备方法和应用，属于基因工程技术领域。该虎γ干扰素包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。上述虎γ干扰素是通过分离培养虎外周血淋巴细胞，ConA诱导其分泌γ干扰素，从淋巴细胞中克隆获得的虎γ干扰素。并且为了更好地利用基因工程技术来开发重组虎干扰素γ制剂，本发明中，还将去除信号肽序列的虎干扰素γ基因序列根据毕赤酵母的偏嗜性进行密码子优化，插入到pPIC9K载体，构建成能分泌表达干扰素γ蛋白的重组表达载体，然后将其导入高效表达系统‑毕赤酵母中。培养毕赤酵母，表达虎γ干扰素蛋白，为后续制备用于增强虎免疫能力和/或抵抗病原微生物感染的药物中提供坚实的基础。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种虎γ干扰素及其表达基因、制备方法和应用。

背景技术

虎(Panthera tigris)是世界上公认的最濒危物种，被列为《华盛顿公约》CITES附录Ⅰ级保护动物，而在现存虎的6个亚种中，东北虎(Panthera tigris altaica)分布于俄罗斯远东地区、中国东北东部林区和朝鲜北部，华南虎野外已功能性灭绝，现存的华南虎仅分布于中国动物园及一些圈养保育机构中，数量仅170多只，是世界最濒危的一个虎亚种。

近年来的一些研究表明，一些虎患有的细菌性、病毒性及寄生虫性疾病使野生东北虎和人工饲养的东北虎、华南虎、孟加拉虎和印支虎受到极大威胁，造成严重的损失，因此对这些疾病的防疫与治疗是不可忽视的。特别是华南虎，因其家族高度近亲，免疫能力低下，提高其非特异性免疫能力对于华南虎种群的健康具有重要的意义。

干扰素(Interferon，IFN)是一种在特定诱生剂的作用下由单核细胞和淋巴细胞产生的具有抗病毒繁殖及免疫调节等功能的蛋白质。干扰素可分为Ⅰ型、II型和Ⅲ型。Ⅰ型干扰素又称病毒干扰素或白细胞干扰素，包括α、β、ω、κ、τ、δ、ξ等，主要功能是抑制病毒增殖。II型干扰素又称免疫干扰素，只有IFN-γ一个成员，主要起免疫调节的作用。Ⅲ型干扰素包括IFN-λ或IL-28/29，在防御和治疗感染方面，对固有免疫和适应性免疫起重要作用。免疫干扰素Gamma干扰素(IFN-γ)起免疫调节作用，对于提高华南虎等虎的免疫能力，抵抗病毒等病原微生物的感染具有重要的作用。

迄今为止，哺乳动物的IFN-γ的研究(尤其是人和猪的研究)已取得很多成果，但虎IFN-γ相关的研究尚处空白。由于至今还没有虎γ干扰素的产品问世，大多是使用猫干扰素来代替虎干扰素。然而猫和虎存在种属差异，其干扰素对虎的病毒性疾病的治疗效果并不是很显著，因而研究虎干扰素是非常有必要的。

现有仅发现有虎α干扰素的原核表达，然而α干扰素具有抗病毒的作用，与IFN-γ的免疫调节作用的机理是不一致的，不存在替代的作用，且虎为真核生物，毕赤酵母也为真核生物，重组虎IFN-γ基因的毕赤酵母其表达的蛋白更接近天然构象，活性更好，较之原核表达具有不可比拟的优势。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种虎γ干扰素及其表达基因、制备方法和应用，能够提供重组虎IFN-γ蛋白，可用于对虎病毒性疾病的治疗。

一种虎γ干扰素，包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

本发明还公开了一种编码上述的虎γ干扰素的表达基因，所述表达基因的序列为：

A)编码权利要求1的虎γ干扰素的核苷酸序列；或者

B)与A)的核苷酸序列编码相同序列的蛋白质，但因遗传密码的简并性而与A)的核苷酸序列不同的序列；或者

C)对上述A)或B)所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失、添加修饰的核苷酸序列。

在其中一个实施例中，所述A)中的核苷酸序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。