[发明专利]一种快速检测鲤鱼浮肿病毒的引物及其方法在审
| 申请号： | 201811649635.9 | 申请日： | 2018-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN109487010A | 公开（公告）日： | 2019-03-19 |
| 发明（设计）人： | 董建国;胡明明;王华南;丛潇;杨忠艳;左晓 | 申请（专利权）人： | 广州动佰生物科技有限公司;信阳农林学院;山西省动物疫病预防控制中心;浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州市科丰知识产权代理事务所(普通合伙) 44467 | 代理人： | 王海曼 |
| 地址： | 510000 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物 快速检测 荧光信号 浮肿 鲤鱼 样本 病毒基因组DNA 病毒 核苷酸序列 荧光检测仪 病毒检测 病原检测 扩增反应 临床样本 实时监测 样本DNA 反应管 灵敏性 试剂盒 引物组 抽提 扩增 探针 异性 配制 检测 | ||
1.一种快速检测鲤鱼浮肿病毒的引物，其特征在于，其核苷酸序列如下所示：
CEV-RPA-F：5`-GTATGGAATTAAGGCATACACTTATTCTCC-3`(SEQ ID NO：1)；
CEV-RPA-R：5`-TTGACGAGGGAATGATTGAGACAAAGTAGA-3`(SEQ ID NO：2)。
2.一种快速检测鲤鱼浮肿病毒的探针，其特征在于，其核苷酸序列如下所示：
CEV-RPA-P：5`-GCTACAATTCCAAGAGCATAATGATATTCAAGA(FAM-dT)(THF)(BHQ1-dT)AGTCTAATTTGATCT-(C3spacer)-3`(SEQ ID NO：3)。
3.一种快速检测鲤鱼浮肿病毒的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
1)从临床样本中提取病毒基因组DNA；
2)以抽提的样本DNA为模板，使用权利要1所述的引物组，权利要求2探针配制RPA反应体系，采用TwistAmp exo试剂盒进RPA扩增反应；
3)将RPA扩增反应管置于荧光检测仪中，实时监测荧光信号，如果有明显的荧光信号曲线，则说明样本中含有CEV，如无荧光信号曲线，则说明样本中不含有CEV。
4.根据权利要求1所述的一种快速检测鲤鱼浮肿病毒的方法，其特征在于，所述的RPA扩增反应的体系为：
5.根据权利要求3所述的一种快速检测鲤鱼浮肿病毒的方法，其特征在于，所述的扩增反应温度39℃，时间20min。
6.根据权利要求3中所述的一种快速检测鲤鱼浮肿病毒的方法，其特征在于，所述的恒温荧光检测仪为Deaou-308c恒温荧光检测仪。
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