[发明专利]一种从甾体发酵液中提取甾体产品的方法

说明书

本发明涉及一种甾体发酵后提取新方法，其包括以下工艺步骤：发酵液升温灭活；初始膜水通量的测定，发酵液进行膜过滤收集截留液，再进行膜的清洗，洗至初始膜水通量；所得截留液继续用甲醇萃取，分层得到甾体产品甲醇萃取液，再继续浓缩至粘稠状加水分散过滤得粗品；粗品再用第一种溶剂升温打浆，降温过滤得一精，一精再用第二种溶剂溶解、脱色、重结晶即得成品。本发明设计合理，工艺简单，可操作性强，工作环境毒害性小，不仅避免了传统工艺全萃法的的乳化难分离现象，而且提供了一种新型的分离方法，避免了有毒萃取有机溶剂的使用，解决了废水处理问题。该法成本低，收率高，最终产品符合市场品质要求。

技术领域

本发明属于甾体系列产品的发酵后提取工艺技术领域，具体涉及一种通过膜分离技术使含培养基的水相和含菌体、油及甾体产品的油相得到有效分离的方法，并解决了行业领域油水分离难的问题，同时使废水也便于处理。

背景技术

甾体化合物是动植物中广泛存在并在生命过程中起重要作用的一类天然产物，如甾醇、维生素D、胆汁酸、许多性激素、肾上腺皮质激素、某些致癌烃、甾族皂素以及甾族生物碱等。“甾”字形象地表现了甾体分子的结构特征，下部分的“田”字代表A、B、C、D四个稠合环，上部分的“〈〈〈”则表示连接的三个侧链。下式显示了甾体化合物的结构通式，甾体主要由A、B、C三个六元环和一个五元环D组成，形成了刚性的甾体骨架。其中R1、R2位通常是甲基、羟基、醛基等，R3位通常是一些碳链的结构，或者含氮、含氧的取代基。

由于侧链的不同以及其取代基如双键、羟基的立体化学差异，决定了其结构多样性和特异的生物学功能，引起人们对这类化学物研究的极大兴趣。甾体类化合物也是重要的医药工业基本原料，采用半合成的方法，经结构改造进行合成，用于生产多种甾体类药物。

4AD、BA、9αOH-AD等主要用来合成许多性激素、孕激素、皮质激素等甾体类药物，是目前市场上最主要的甾体类药物上游中间体。结构如下：

陶瓷膜是以氧化铝、氧化锆等经高温烧结而成的具有多孔结构的精密陶瓷过滤材料，其多孔支撑层、过滤层及微滤膜层呈非对称分布，建立于无机材料科学基础上的无机陶瓷膜具有比板框、离心机、硅藻土等传统分离介质及聚合物膜无法比拟的一些优点：

·耐高温、耐有机溶剂；

·分离精度高，透过液澄清透明，大大减轻后续处理难度；

·孔径分布的误差小，孔的直径均一；

·较高的过滤精度，较高的空隙率；

·化学稳定性极佳，能耐酸、耐碱、耐氧化；

·机械强度大，耐磨性好；

·易清洗，可在线药剂或高温消毒，可反向冲洗。

陶瓷膜分离技术是基于多孔陶瓷介质的筛分效应而进行的物质分离技术，采用与传统“死端过滤”“滤饼过滤”等过滤方式截然不同的动态“错流过滤”方式：即在压力驱动下，原料液在膜管内侧膜层表面以一定的流速高速流动，小分子物质(液体)沿与之垂直方向透过微孔膜，大分子物质(或固体颗粒)被膜截留，使流体达到分离浓缩和纯化的目的。

在甾体系列油发酵后提取中，由于发酵体系主要为菌体、油、甾体产品、培养基、水等，所以如何使含培养基的水相和含菌体、油及甾体产品的油相得到有效分离，是后提取工艺的关键技术所在。随着发酵法在甾体行业的日益发展，4AD、 BA、9αOH-AD等这一类的上游中间体市场需求量越来越大，而这一类的中间体，基本都是通过油发酵获得，因此，如何有效快速的分离并提纯得到满足市场要求的这一类中间体成品，是市场所需，也是行业技术发展的重要方向。

目前，市场上这一类产品已经规模化生产的油水分离工艺主要有以下几种：