[发明专利]一种长链多肽的纯化方法

权利要求书

1.一种长链多肽的纯化方法，其包括如下步骤：

1）纯化步骤：采用两根色谱柱串联进行粗品的分离；

 步骤 1）中上游色谱柱填料为 粒径10μm 的 C18 硅胶填料，下游色谱柱为 粒径5μm的C18 硅胶填料；

步骤 1）流动相：A1 相为缓冲盐溶液，其 pH 值为 2-3，所述缓冲盐溶液为硫酸铵、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾中的一种或几种；B 相为有机相，所述的有机相为乙腈、甲醇、异丙醇和乙醇；缓冲盐物质的量浓度为 20mM-150mM，检测波长：230 nm；

步骤 1）包括以梯度洗脱：A1%：95%-55%，B%： 5%—45%，洗脱时间为30-120 分钟；在洗脱过程中，当上游色谱柱的流出峰为杂质峰时弃去相应的流动相，当上游色谱柱的流出峰为目标峰时启动在上下游色谱柱中间设置的三通混合器所连接的色谱泵，输入纯化水，进行在线稀释，在线稀释后目标峰进入下游色谱柱；

所述纯化方法还包含作为转盐的步骤 2）：

步骤 2）采用步骤 1）中的上游色谱柱进行转盐，A2 相为体积比0.05%-0.2%的醋酸水溶液；B 相为有机相，所述的有机相为乙腈；检测波长：230 nm；

步骤 2）包括：将步骤 1）得到的目标峰产物进行上样；以 95% A2 和 5%的B 冲洗 15-30min 进行脱盐；

然后以梯度洗脱进行转盐，A2%：95%-55%，B%： 5%-45%，洗脱 10-30min， 收集目标产物；

所述的在线稀释为目标峰进入下游色谱柱前，经过第三泵输入 10%纯化水，降低有机相比例；

所述的长链多肽为乌拉立肽。

2.一种长链多肽的纯化方法，其包括如下步骤：

1）纯化步骤：采用两根色谱柱串联进行粗品的分离；

步骤 1）中上游色谱柱填料为 粒径10μm 的 C18 硅胶填料，下游色谱柱为 粒径5μm的C18 硅胶填料；

步骤 1）流动相：A1 相为缓冲盐溶液，其 pH 值为 8，所述缓冲盐溶液为碳酸氢铵；B相为有机相，所述的有机相为乙腈、甲醇、异丙醇和乙醇；缓冲盐物质的量浓度为 20mM-150mM，检测波长：230 nm；

步骤 1）包括以梯度洗脱：A1%：95%-55%，B%： 5%—45%，洗脱时间为30-120 分钟；在洗脱过程中，当上游色谱柱的流出峰为杂质峰时弃去相应的流动相，当上游色谱柱的流出峰为目标峰时启动在上下游色谱柱中间设置的三通混合器所连接的色谱泵，输入纯化水，进行在线稀释，在线稀释后目标峰进入下游色谱柱；

所述纯化方法还包含作为转盐的步骤 2）：

步骤 2）采用步骤 1）中的上游色谱柱进行转盐，A2 相为体积比0.05%-0.2%的醋酸水溶液；B 相为有机相，所述的有机相为乙腈；检测波长：230 nm；

步骤 2）包括：将步骤 1）得到的目标峰产物进行上样；以 95% A2 和 5%的B 冲洗 15-30min 进行脱盐；

然后以梯度洗脱进行转盐，A2%：95%-55%，B%： 5%-45%，洗脱 10-30min， 收集目标产物；

所述的在线稀释为目标峰进入下游色谱柱前，经过第三泵输入 10%纯化水，降低有机相比例；

所述的长链多肽为萨摩鲁肽或利拉鲁肽。

3.根据权利要求 1 或 2 所述的纯化方法，步骤 1）中上游色谱柱填长度为10-15cm，下游色谱柱长度为 10-15cm。

4.根据权利要求 1 或 2 所述的纯化方法，步骤 1）包括以梯度洗脱：A1%：85%-65%，B%： 15%—55%，洗脱时间为 50-70 分钟。

5.根据权利要求 1 所述的纯化方法，A1 相 pH 值为 2.2-2.8。

6.根据权利要求 1 或 2 所述的纯化方法，A2 相为体积比 0.1%-0.4%的醋酸铵溶液。

7.根据权利要求 1 或 2 所述的纯化方法，步骤 2）以 95% A2 和 5% B 冲洗15-30min 进行脱盐。

8.根据权利要求 1 或 2 所述的纯化方法，步骤 2）以梯度洗脱进行转盐，A2%：85%-65%，B%：15%-35%，洗脱 10-30min，收集目标产物。