[发明专利]一种长链多肽的纯化方法

说明书

本发明提供了一种长链多肽的纯化方法，其包括步骤1)，即纯化步骤：采用两根色谱柱串联进行粗品的分离，其中，上游色谱柱中填料的粒径比下游色谱柱填料粒径大；可选地，还包括作为转盐的步骤2)：采用步骤1)中的上游色谱柱进行转盐，将步骤1)得到的目标峰产物进行上样；以95％‑85％的A2和5％‑15％的B冲洗15‑30min进行脱盐，其中，A2相为体积比0.05％‑0.2％的醋酸水溶液，B相为有机相乙腈，检测波长为230nm。

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种长链多肽药物的纯化方法。

背景技术

Ularitide(乌拉立肽)是一种是由Cardiorentis(AG)开发的促尿钠排泄环肽，它由32个氨基酸残基，最初是在1988年由Schulz-Knappe等从尿液中分离得到的一种属于心房钠尿肽(atrialnatriureticpeptide，ANP)家族的肾利钠肽，主要用于治疗急性心力衰竭。

分子式如下：

流行病学资料显示，目前全球心衰患者的数量已高达2250万，并且仍以每年200万的速度递增。且5年存活率与恶性肿瘤相仿，20％的心衰患者出院将在30天内再住院，花费了大量医疗费用。我国成年人心衰的患病率为0.9％，其中男性为0.7％，女性为1.0％，目前35～74岁成年人中仍约有400万的心衰患者，并呈逐年上升趋势。常见病因包括冠心病、高血压、心肌病和(或)瓣膜病、糖尿病等，其中冠脉疾病是心力衰竭的重要原因。据统计，全球每年花费在心衰上的资金为1080亿美元，2003年一项大型流行病学调查显示，中国内地成年人心衰患病率已达0.9％，约有心衰患者450万人。心衰分急性心衰和慢性心衰，美国过去10年中，因急性心衰而急诊就医者达1千万例次。急性心衰患者中约15～20％为首诊心衰，大部分则为原有的心衰加重，所有引起慢性心衰的疾病都可导致急性心衰。随慢性心衰患者数量逐渐增加，慢性心功能失代偿和急性心衰发作，也已成为心衰患者住院的主因，每年心衰的总发病率为0.23％～0.27％。急性心衰预后很差，住院病死率为3％，60d病死率为9.6％，3年和5年病死率分别高达30％和60％。急性心肌梗死所致的急性心衰病死率更高。急性肺水肿患者的院内病死率为12％，1年病死率达30％，所以乌拉立肽市场前景广阔。

现有多肽纯化，主要是采用高效液相制备系统制备，有机相为乙腈、甲醇等，使用量较大，废液排放量也较大。废液回收难处理，危险性也较大，随着肽序的延长，废液排放量将会更庞大，纯化周期也相应变长，企业成本也较大。环保、安全和成本问题已经制约着制药企业的发展，急需要一种降低企业成本和废液排放量的纯化方法，最大限度的降低有机废液储存中的危险性。

乌拉立肽主要用于急性心衰，所以质量显得尤为重要。乌拉立肽肽序较长，中间还要经过一步氧化，杂质更多，为了提高药物的安全性，现有多肽药物纯度要求也越高越好，大多要求纯度大于99％，并需对单杂进行控制，要求单杂小于0.10％，传统纯化过程达到此标准，一般需要经过两步纯化，一步转盐，收率将会特别低；人力成本、环境成本以及产品成本都将较大。

对于多肽的纯化主要是通过反相色谱纯化，采用的固定相一般包括C18，C8，C4，C1等等，另外就是最近有些项目采用聚合物填料进行纯化甚至其它反相填料，但无论采用何种类型的填料，纯化的过程基本无变化，基本过程有2种，一种通过高压填装同种填料制备柱，柱长一般25cm左右，粒径大多为10μm，然后通过不同的色谱条件进行纯化，然后对不合格部分进行回收，最终获得合格的产品，另一种为高压填装不同类型填料的制备柱，通过柱长为25cm左右，粒径一般为10μm，然后通过不同的色谱条件进行纯化，然后对不合格部分进行回收纯化，最终获得合格的产品，对于肽序较短的多肽，以上两种方式一般经过一步纯化即可完成，而对于肽序大于25个氨基酸的多肽产品，基本需要两步纯化，加上脱盐或转盐，共需要三步才可以完成，两种方式的缺点就是规模放大后，周期较长，另不合格中间体需要经过多次回收才能得到合格产品，因为需要回收纯化，周期延长，有机溶剂使用量变大，废液排放也变多，最终产品的成本变高，质量风险和有机溶剂危险系数也变大。