[发明专利]磁珠-核酸适配体-多靶分子同时检测的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种磁珠-适配体-多靶分子同时检测的方法，其特征在于，包括下述步骤：

(1)孵育：磁珠-适配体和标本一起孵育，形成磁珠-适配体-靶分子复合物；

(2)酸洗脱：加入洗脱缓冲液,晃动，收集洗脱液，立即加入内含有检测靶分子的标准肽段的TrisHCL中和；

(3)质谱定性定量检测指定的靶分子；

(4)通过数据平台分析系统进行分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述标本包括血清、尿液、体液，以及细胞和组织悬液中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中的适配体是针对所述标本利用指数富集的配基系统进化技术筛选获得的特异性核酸适配体组。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中酸洗脱分离适配体和靶分子的洗脱效率为98％以上。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述标准肽段是指为准确对指定蛋白肽段进行定性定量，在质谱样本中带进的参照标准肽段。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述靶分子是经过实验筛选获得的具有特异性标志的靶分子。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)根据检测到的指定蛋白的量效关系而推测功能机制，作出分析报告。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述标本通过以下方法制备：

按静脉穿刺法采取所需血量，立即卸下针头，将血液注入盛有抗凝剂的试管内，立即轻轻摇动，使血液和抗凝剂混匀，以防血液凝固，然后在3000-6000转/min下离心，分离血清即得。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述磁珠-适配体-靶分子复合物通过以下方法形成：

将100μL所述标本与50μL所述磁珠-适配体一起37℃孵育30分钟，经3χSSC洗涤一次，20倍体积的0.4mM Binding Buffer洗涤3次，磁分离即得。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，包括以下步骤：

在步骤(1)所述磁珠-适配体-靶分子复合物中加入0.5ml洗脱缓冲液,晃动1min，收集洗脱液，立即加入250μL、pH为8.0、1M的TrisHCL中和，重复洗脱三次，混合三次洗脱中和液，即得质谱靶分子检测液。

11.一种磁珠-适配体-多靶分子同时检测的试剂盒，其特征在于，包括：

试剂1：5-10mL、pH值为7.4的0.01-0.1M磷酸盐缓冲液，内溶50％粒径5-50nm的链霉亲和素琼脂磁珠微粒；

试剂2：5-10mL、pH值为7.4的0.4mM1×Binding Buffer缓冲液，内溶有0.003-0.3ug/L生物素化的特异性核酸适配体；

试剂3：洗脱缓冲液。

12.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述洗脱缓冲液包括甘氨酸、氯化钠和Tween20。