[发明专利]制备核酸文库的方法和用于实施所述方法的组合物和试剂盒

权利要求书

1.一种由核糖核酸(RNA)样品制备表达文库和免疫细胞受体谱系文库的方法，所述方法包括：

(a)使用模板转换逆转录反应，由RNA样品产生产物双股cDNA；

(b)将所产生的产物双股cDNA分割为第一反应混合物和第二反应混合物；以及

(c)末端捕捉所述产物双股cDNA以由所述第一反应混合物产生表达文库，并扩增所述产物双股cDNA的免疫细胞特异性cDNA以由所述第二反应混合物产生免疫细胞受体谱系文库。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述RNA样品从细胞样品获得。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述RNA样品从单细胞获得。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述单细胞是T细胞或B细胞。

5.根据权利要求2至4中任一项所述的方法，其中所述方法还包括在所述分割前汇集由多个单细胞RNA样品产生的产物双股cDNA。

6.根据权利要求2至5中任一项所述的方法，其中用于产生所述产物双股cDNA的引物或寡核苷酸包含鉴定产生所述产物双股cDNA的所述单细胞的索引序列。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述引物或寡核苷酸是模板转换寡核苷酸。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括对所述表达文库和所述免疫细胞受体谱系文库测序。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述扩增包括使所述第二反应混合物与5’扩增引物和免疫细胞受体特异性扩增引物接触。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述免疫细胞受体特异性扩增引物与免疫细胞受体的一条或多条链的恒定区特异性杂交。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述免疫细胞受体是T细胞受体(TCR)或B细胞受体(BCR)。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中产生所述产物双股cDNA包括在足以产生所述产物双股cDNA的条件下在反应混合物中组合：

所述RNA样品；

第一股互补脱氧核糖核酸(cDNA)引物；

包含3’杂交结构域和5’接头序列结合域的模板转换寡核苷酸；

逆转录酶；以及

dNTP。

13.一种试剂盒，其包含：

5’扩增引物；

免疫细胞受体特异性扩增引物；以及

末端扩增引物。

14.一种由多个单细胞制备免疫细胞受体谱系文库的方法，所述方法包括：

(a)从所述多个单细胞中的每个单细胞分离RNA样品；

(b)使用模板转换逆转录反应，由所述RNA样品产生索引产物双股cDNA；

(c)汇集所产生的索引产物双股cDNA；

(d)扩增所述索引产物双股cDNA的免疫细胞特异性cDNA以产生包含单细胞索引免疫细胞特异性cDNA的免疫细胞受体谱系文库。

15.一种试剂盒，其包含：

包含5’接头序列的模板转换寡核苷酸；

包含所述5’接头序列的5’扩增引物；以及

免疫细胞受体特异性扩增引物。