[发明专利]单体人IgG1 Fc和双特异性抗体

权利要求书

1.一种单体Fc多肽，其包含CH2和CH3结构域，其中所述CH3结构域仅包含在对应于根据Kabat编号的SEQ ID NO:1的位置T366和Y407的位置处的两个氨基酸置换，其中T366被L(亮氨酸)置换，而Y407被I(异亮氨酸)、F(苯丙氨酸)、L(亮氨酸)、M(甲硫氨酸)、H(组氨酸)、K(赖氨酸)、S(丝氨酸)、Q(谷氨酰胺)、T(苏氨酸)、W(色氨酸)、A(丙氨酸)、G(甘氨酸)或N(天冬酰胺)置换。

2.一种非天然存在的单体Fc多肽，其为SEQ ID NO:1所示的多肽的变体，其中所述变体仅包含在根据Kabat编号的位置T366和Y407处的氨基酸置换，其中T366被L(亮氨酸)置换，Y407被I(异亮氨酸)、F(苯丙氨酸)、L(亮氨酸)、M(甲硫氨酸)、H(组氨酸)、K(赖氨酸)、S(丝氨酸)、Q(谷氨酰胺)、T(苏氨酸)、W(色氨酸)、A(丙氨酸)、G(甘氨酸)或N(天冬酰胺)置换。

3.根据权利要求2的单体Fc多肽，其具有选自SEQ ID NO:3、5和9-17的氨基酸序列。

4.一种单体Fc融合蛋白，其包含根据权利要求1-3中任一项所述的单体Fc多肽和与所述单体Fc多肽融合的抗体可变结构域。

5.一种抗体重链，其包含根据权利要求1-3中任一项所述的单体Fc多肽。

6.一种单体抗体，其包含根据权利要求4所述的单体Fc融合蛋白或权利要求5所述的抗体重链，和抗体轻链。

7.一种多核苷酸，其编码根据权利要求1-3中任一项所述的单体Fc多肽。

8.一种表达载体，其包含根据权利要求7所述的多核苷酸，所述多核苷酸编码所述单体Fc多肽。

9.一种宿主细胞，其包含根据权利要求8所述的表达载体，所述表达载体编码所述单体Fc多肽。

10.一种制备单体Fc多肽的方法，其中所述方法包括以下步骤：(a)在其中表达根据权利要求1-3中任一项所述的单体Fc多肽的条件下培养宿主细胞，所述宿主细胞包含编码所述单体Fc多肽的DNA；和(b)从宿主细胞培养物中回收所述单体Fc多肽。

11.一种双特异性抗体，其包含单一多肽链，所述多肽链包含根据权利要求1-3中任一项所述的单体Fc多肽。

12.根据权利要求11的双特异性抗体，其包含四个可变区，所述可变区按以下顺序中的任一种排列：

(a)VH1-接头1-VL1-接头2-VH2-接头3-VL2；

(b)VL1-接头1-VH1-接头2-VL2-接头3-VH2；

(c)VH1-接头1-VL1-接头2-VL2-接头3-VH2；和

(d)VL1-接头1-VH1-接头2-VH2-接头3-VL2；

其中，所述VH1和VL1形成第一抗原结合对，并且所述VH2和VL2形成第二抗原结合对。

13.根据权利要求12的双特异性抗体，其中所述第一抗原结合对结合靶细胞蛋白，并且所述第二抗原结合对结合效应细胞蛋白；或所述第一抗原结合对结合效应细胞蛋白，并且所述第二抗原结合对结合靶细胞蛋白。

14.一种双特异性抗体，其包含第一多肽链和第二多肽链，所述第一多肽链包含根据权利要求1-3中任一项所述的单体Fc多肽。

15.根据权利要求14的双特异性抗体，其中所述第二多肽链包含权利要求1-3中任一项所述的单体Fc多肽。

16.根据权利要求15的双特异性抗体，其中所述第一多肽链中的单体Fc多肽的N端或C端通过接头与轻链恒定区(CL)连接，CL的N端或C端通过另一接头与单链可变片段(scFv)连接；并且所述第二多肽链中的单体Fc多肽的N端或C端通过接头与重链恒定区1(CH1)连接，CH1的N端或C端通过另一接头与另一种scFv连接；并且其中所述第一多肽链和所述第二多肽链通过CL和CH1的异二聚化连接。