[发明专利]使用经修饰的肿瘤细胞和经修饰的树突细胞增强肿瘤免疫原性的方法和用于自体癌症免疫治疗产品的组合物

说明书

本说明书提供了用于增加癌细胞的免疫原性和抗原含量(特别是肿瘤相关抗原(TAA)的含量)的方法；用于增强树突细胞中交叉呈递的方法、包含来源于单个癌症患者的此类操纵细胞的组合物；以及使用这些组合物作为个人免疫治疗产品来治疗供体患者的癌症的方法。

背景技术

恶性细胞与免疫系统之间的相互作用包括通过先天和适应性免疫系统，特别是通过识别特定肿瘤相关抗原(TAA)的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)消除癌细胞，或者免疫系统与抗性癌细胞之间的平衡，或者对免疫控制的逃避，所述对免疫控制的逃避使得癌细胞能够逃逸并导致最终临床检测到癌症。特异性免疫疗法，诸如细胞因子白细胞介素-2，能够驱动现有的免疫应答，并且检查点抑制剂，诸如抗CTLA-4、以及PD-1和抗PD-L1，能够释放受此类抑制剂阻抑的抗肿瘤应答。然而，高百分比的癌症患者缺乏对他们的恶性细胞的充分免疫识别，此类方法无法成功控制或消除他们的癌症。也就是说，他们没有证据表明CTL肿瘤浸润或PD-1表达增加作为持续免疫应答的证据，或者没有证据表明PDL-1表达增加作为迟钝的免疫应答的证据。因此，仍然需要在癌症患者中刺激抗癌免疫应答的改进方法。

发明内容

所公开的实施方式包括自体免疫疗法产品，其包含自体树突细胞(DC)，所述自体树突细胞(DC)载有来自自体癌细胞的肿瘤相关抗原(TAA)。此类产品、以及它们包含的pDC是离体产生的，并且不涵盖通过自然过程或在身体暴露于本文公开的试剂(agent)类别后在体内产生的DC。尽管如此，这些产品和组合物在离体产生后可以施用于受试者的身体，特别是需要治疗癌症的受试者。在各种实施方式中，DC或癌细胞或两者经体外操纵以增强靶向TAA的免疫原性。从待治疗患者的肿瘤获得的活癌细胞可以暴露于增加TAA在肿瘤细胞中的表达和/或累积的试剂，从而增加TAA的存在量，或者可以降低癌细胞的致耐受性。类似地，可以治疗癌细胞以改善它们的免疫原性。DC可以暴露于氨基糖苷类，所述氨基糖苷类改变细胞内内体-溶酶体运输，从而增强外源性抗原的交叉呈递。将DC暴露于裂解的或完整但无活力的(non-viable)肿瘤细胞，使得DC变成载有并加工TAA。然后可以将载有TAA的DC作为免疫治疗产品施用至原始供体癌症患者。参见图1。

所公开的实施方式包括修饰癌细胞以改善其TAA特异性和总体免疫原性的方法，以及修饰DC以提高其交叉呈递水平的方法。进一步的实施方式包括组合物，其包含经修饰的DC、经修饰的癌细胞或其裂解物、或两者。通过在灭活的癌细胞或细胞裂解物(癌细胞材料)存在下培养DC来使DC载有抗原。在一些实施方式中，在抗原加载后不采取步骤从DC培养物中去除残留的癌细胞材料，由此包含载有抗原的DC的组合物将包含尚未被DC摄取的任何残留的癌细胞材料，除非另外特别说明。载有自体抗原的DC是本文所述的个性化抗癌免疫治疗产品的主要组分。还公开了这些免疫治疗产品在治疗癌症中的用途，以及癌症治疗方法，所述癌症治疗方法包括施用这些免疫治疗产品。最后，公开了修饰DC和修饰癌细胞以改善它们成为组分的免疫治疗产品的免疫原性和有效性的特定方法。

通过暴露于氨基糖苷类抗生素(诸如庆大霉素)或Toll样受体4(TLR-4)激动剂(诸如脂多糖(LPS))可以增加由DC进行的交叉加工。在一些实施方式中，从单核细胞分化成未成熟DC的过程开始时添加交叉加工增强剂。在这些实施方式的一个方面中，交叉加工增强剂的浓度相对较低。在一些实施方式中，从DC成熟和抗原加载过程开始时，加入交叉加工增强剂或增大交叉加工增强剂的浓度。在这些实施方式的一个方面中，交叉加工增强剂的浓度相对较高。在一些实施方式中，TLR-4激动剂，诸如LPS，被用作成熟剂。