[发明专利]来自人工多能性干细胞的肠道干细胞的维持培养

权利要求书

1.一种培养来自人工多能性干细胞的肠道干细胞样细胞的方法，其包含下述工序：将来自人工多能性干细胞的肠道干细胞样细胞在GSK-3β抑制剂、组蛋白去乙酰化抑制剂及血清替代物的存在下、或在GSK-3β抑制剂及血清替代物的存在下进行培养的工序。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，GSK-3β抑制剂为CHIR 99021、SB216763、CHIR98014、TWS119、Tideglusib、SB415286、BIO、AZD28 58、AZD1080、AR-A014418、TDZD-8、LY2090314、IM-12、靛玉红、Bikinin或1-氮杂坎帕罗酮，组蛋白去乙酰化抑制剂为丙戊酸、伏立诺他、曲古霉素A、tubastatin A、givinostat或pracinostat，血清替代物为基因敲除血清替代物。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述培养在进一步存在选自上皮生长因子、TGFβ受体抑制剂及成纤维细胞生长因子中的一种以上的化合物的条件下进行。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，TGFβ受体抑制剂为A-83-01，成纤维细胞生长因子为FGF2、FGF4或FGF10。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述培养在进一步存在选自BMP抑制剂、Wnt信号活化剂及Wnt激动剂中的一种以上的化合物的条件下进行。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，BMP抑制剂为Noggin，Wnt信号活化剂为R-spondin1，Wnt激动剂为Wnt3a。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，所述培养在进一步存在选自烟酰胺、N-乙酰基半胱氨酸、p38抑制剂及ROCK抑制剂中的一种以上的化合物的条件下进行。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，p38抑制剂为SB202190，ROCK抑制剂为Y-27632。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的方法，其中，人工多能性干细胞为人的人工多能性干细胞。

10.一种制备肠道上皮细胞样细胞的方法，其包含使通过权利要求1～9中任一项所述的方法培养的肠道干细胞样细胞分化为肠道上皮细胞样细胞的工序。

11.一种肠道上皮细胞样细胞，其是通过权利要求10所述的方法得到的。

12.一种评价受检物质的体内动态或毒性的方法，其使用了权利要求11所述的肠道上皮细胞样细胞。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述体内动态是代谢、吸收、排泄、药物相互作用、药物代谢酶的诱导、或药物转运蛋白的诱导。

14.根据权利要求12或13所述的方法，其包含以下的工序(i)～(iii)：

(i)准备由权利要求11所述的肠道上皮细胞样细胞构成的细胞层的工序；

(ii)使受检物质与所述细胞层接触的工序；

(iii)对透过了所述细胞层的受检物质进行定量，对受检物质的吸收性或膜透过性、药物相互作用、药物代谢酶的诱导、药物转运蛋白的诱导、或毒性进行评价的工序。

15.根据权利要求12或13所述的方法，其包含以下的工序(I)和(II)：

(I)使受检物质与权利要求11所述的肠道上皮细胞样细胞接触的工序；

(II)对受检物质的代谢或吸收、药物相互作用、药物代谢酶的诱导、药物转运蛋白的诱导、或毒性进行测定、评价的工序。