[发明专利]来自人工多能性干细胞的肠道干细胞的维持培养

说明书

本发明的课题在于提供能够在维持肠道干细胞的性质的情况下对来自人工多能性干细胞的肠道干细胞进行维持、培养的培养方法。将来自人工多能性干细胞的肠道干细胞样细胞在GSK‑3β抑制剂、组蛋白去乙酰化抑制剂及血清替代物的存在下、或在GSK‑3β抑制剂及血清替代物的存在下进行培养。优选在进一步存在选自上皮生长因子、TGFβ受体抑制剂及成纤维细胞生长因子中的一种以上的化合物的条件下进行培养。

技术领域

本发明涉及培养来自人工多能性干细胞的肠道干细胞的技术及其用途。本申请主张基于2017年2月20日申请的日本专利申请第2017-029448号的优先权，通过参照援用该专利申请的全部内容。

背景技术

小肠中存在大量的药物代谢酶和药物转运蛋白，因此与肝脏同样，作为与药物的初次通过效果相关的脏器非常重要。因此，从药品开发早期阶段起评价药品在小肠中的膜透过性、代谢，需要开发药代动力学特性优异的药品。目前，作为小肠的模型系，多使用来自人结肠癌的Caco-2细胞。但是，Caco-2细胞中的药物转运蛋白的表达模式与人小肠不同。另外，由于在Caco-2细胞中几乎未见药物代谢酶的表达和酶诱导，因此难以准确地评价小肠中的药代动力学。因此，为了综合评价小肠中的药物代谢和膜透过性，希望利用原代小肠上皮细胞，但原代小肠上皮细胞的获得困难。

因此，期待利用由与人胚胎干细胞(embryonic stem cells：ES细胞)同样具有多分化能力和几乎无限的增殖能力的人的人工多能性干细胞(iPS细胞)制作的肠道上皮细胞。

另外，虽然报告了几项从生物体的肠道分离肠道干细胞、在体外培养肠道干细胞、肠道上皮细胞的技术或从人iPS细胞分化诱导肠道上皮细胞的技术(例如参照专利文献1～4、非专利文献1～3)，但没有报告以来自人iPS细胞的肠道干细胞的维持或增殖为目的的培养技术。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2014/132933号小册子

专利文献2：日本特表2016-512958号公报

专利文献3：日本特表2014-516562号公报

专利文献4：日本再表2012-060315号公报

非专利文献

非专利文献1：Yin X.et al.,Niche-independent high-purity cultures of Lgr5(+)intestinal stem cells and their progeny.Nature Methods,2014.11(1)：p.106-112.

非专利文献2：Wang X.et al.,Cloning and Variation of Ground State Intestinal Stem Cells.Nature,522(7555)：173-178.(2015)

非专利文献3：Sato T.et al.,Long-term expansion of epithelial organoidsfrom human colon,adenoma,adenocarcinoma,and Barrett’s epithelium.Gastroenterology.2011 Nov；141(5)：1762-72

技术内容

发明所要解决的课题

本发明的课题在于从iPS细胞使其分化为肠道上皮细胞需要大量的时间和费用。另外，为了大量地供给来自人iPS细胞的肠道上皮细胞，开发分化中途的肠道干细胞阶段时的培养技术是必不可少的。因此，本发明的课题在于提供能够在维持肠道干细胞的性质、即未分化性、增殖能力及向肠道上皮细胞分化的能力的情况下对来自iPS细胞的肠道干细胞进行维持、培养的培养技术及其应用、用途。