[发明专利]诱导性多能干细胞的制作方法

说明书

根据本公开，提供一种诱导性多能干细胞的制作方法，其包含：准备体细胞的步骤；将含有启动因子RNA的仙台病毒导入至体细胞的步骤。而且，根据本公开，提供一种诱导性多能干细胞的制作方法，其包含：准备体细胞的步骤；使用RNA转染试剂将启动因子RNA导入至体细胞的步骤；在凝胶培养基中对体细胞进行初始化的步骤。

技术领域

本发明涉及细胞技术，涉及诱导性多能干细胞的制作方法。

背景技术

所谓诱导性多能干(induced pluripotent stem，iPS)细胞是具有两种特征能力的细胞。一种是能够变化为构成身体的任意细胞的能力。另一种是具有半永久性的增殖能力。由于iPS细胞具有这两种能力，故可以通过由自身的体细胞制作iPS细胞，使其变化为目标体细胞，从而应用于并无排斥反应的移植治疗中。因此，iPS细胞被认为是再生医疗的强大技术。

从iPS细胞的诞生到现在，已经确立了很多其制作方法。作为代表性的iPS细胞的制作方法，可列举使用逆转录病毒/慢病毒的方法、及使用附加型载体的方法。

对使用逆转录病毒/慢病毒的方法加以说明。可以使体细胞感染逆转录病毒或慢病毒，将编码启动因子的基因导入至细胞内。另外，逆转录病毒或慢病毒可以将启动因子插入到体细胞的基因组中，诱导启动因子在细胞内的稳定的表达。

然而，在使用逆转录病毒/慢病毒的方法中存在以下的问题点。首先，将启动因子插入到体细胞的基因组中会损伤已有的基因或启动子，因此可能成为细胞癌变的原因。而且，插入到基因组上的启动因子可能在使iPS细胞变化为体细胞后再次活性化。因此，在来自iPS细胞的移植用细胞中存在癌变的风险。事实上，在小鼠模型中，在体细胞中观察到所导入的启动因子的再次活性化，且确认了癌变(例如参照非专利文献1)。

附加型载体是环状DNA，在细胞核内进行自我扩增。至于附加型载体，尽管认为原则上并不并入到基因组中，但是在最近的研究中报告了如下现象：在由附加体生成的iPS细胞的基因组上，散布插入了附加型载体的片段。因此，存在重编程基因会残存于细胞内的问题。例如，如果c-MYC或KLF4残存于细胞内，则成为癌变的原因。检查重编程基因是否残存于细胞内需要高额的费用。不可能表明在移植细胞池中的所有细胞中，附加体质粒并未插入到基因组，并未残存。

由于在使用逆转录病毒/慢病毒的方法、及使用附加型载体的方法中存在上述问题，因此提出了使用RNA制作iPS细胞的方法(例如参照非专利文献2)。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1:Nature 448,313-317

非专利文献2:Nature Biotechnol 26(3):313-315,2008.

发明内容

发明所欲解决的课题

需要将启动因子RNA有效率地导入至体细胞的方法。本发明的目的之一在于提供适合临床应用的安全的诱导性多能干细胞的有效率的制作方法。

解决问题的手段

根据本发明的实施方式而提供一种诱导性多能干细胞的制作方法，其包含：准备体细胞的步骤；将含有启动因子RNA的仙台病毒导入至体细胞的步骤。

于上述诱导性多能干细胞的制作方法中，可以将含有启动因子RNA的仙台病毒导入至在凝胶培养基中悬浮培养的体细胞。

于上述诱导性多能干细胞的制作方法中，可以将含有启动因子RNA的仙台病毒导入至附着培养的体细胞。

上述诱导性多能干细胞的制作方法可以进一步包含在凝胶培养基中对体细胞进行初始化的步骤。

于上述诱导性多能干细胞的制作方法中，体细胞可以是纤维母细胞。