[发明专利]分离抗体的分离基质和方法

说明书

包含抗体‑结合蛋白配体已被共价固定于其上的多孔粒子的分离基质，其中所述配体的密度为大于5 mg/ml，所述多孔粒子的体积‑加权中位直径为至少10μm和小于30μm，和所述多孔粒子具有0.5‑0.9的凝胶相分配系数，所述凝胶相分配系数表示为对分子量110 kDa的葡聚糖的K_D。

本发明的技术领域

本发明涉及分离基质，且更特别地涉及可用于抗体分离的分离基质。本发明还涉及在基质上分离抗体的方法。

发明背景

在治疗性单克隆抗体(mAb)的制备中，在包含偶联的葡萄球菌(Staphylococcus)蛋白A(SpA)或SpA的变体的基质上的亲和色谱通常用作第一分离步骤，以除去大多数污染物。由于治疗性mAb的需求不断增加，对于提高分离过程的效率存在强大的驱动力，且几种方法正在评估中。

多柱连续色谱过程是可利用的，其中所述进料被施加于第一个柱，并且当第一个柱趋于饱和时则转移到一个或多个随后的柱中，在洗脱和再生随后的柱期间洗脱第一个柱并再生以再次加载。这样的过程可代表周期性反流色谱(PCC)或模拟移动床(SMB)并对分离治疗性mAb具有相当大的意义，见例如US7901581、US20130248451、US20130280788和US7220356，其通过引用以其整体结合到本文中。PCC/SMB过程可显著增加生产率，但似乎用目前可获得的分离基质(其被设计用于传统批量色谱)不能达到全部潜力。

因此，对专门设计用于连续色谱过程的新的分离基质和对使用这样的基质的方法存在着需求。对于以非常短的停留时间，特别是当用于具有低水力阻力的浅床时提供高动态结合能力的分离基质，也存在普遍需要。

发明概述

本发明的一个方面是提供一种允许以高生产率在浅床中分离mAb的分离基质。这用包含抗体-结合蛋白配体已被共价固定于其上的多孔粒子的分离基质实现，其中所述配体的密度为大于5 mg/ml，和所述多孔粒子的体积-加权中位直径为至少10 μm和小于30 μm。

一个优点是基质在非常短的停留时间内具有高结合能力。

本发明的第二方面是提供一种允许以高生产率连续分离mAb的色谱柱。这用如在权利要求书中定义的柱实现。

本发明的第三方面是提供一种允许以高生产率连续分离mAb的多柱色谱系统。这用如在权利要求书中定义的系统实现。

本发明的第四方面是提供一种分离抗体的有效方法。这用如在权利要求书中定义的方法实现。一个优点是该方法允许非常短的停留时间以及高结合能力。

本发明的其它合适的实施方案在所附权利要求书中描述。

附图

图1显示蛋白A Fc-结合结构域的比对。

图2显示与50 µm参考871相比，对于原型128A的动态IgG能力与停留时间。

图2显示对于原型902B和902A的动态IgG能力与停留时间。

图4显示依据本发明的柱。

图5显示依据本发明的色谱系统。

定义

术语“抗体”和“免疫球蛋白”在本文可互换使用，和被理解为还包括抗体的片段、包含抗体或抗体片段的融合蛋白和包含抗体或抗体片段的缀合物。

术语“Fc-结合多肽”和“Fc-结合蛋白”分别意指能够结合抗体的可结晶部分(Fc)的多肽或蛋白，和包括例如蛋白A和蛋白G，或维持所述结合性质的其任何片段或融合蛋白。

术语“接头”在本文中意指将多聚体中的两个多肽单元、单体或结构域彼此连接的元件。