[发明专利]用于去除不需要的核酸的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种去除至少一种不需要的RNA种类的方法，其包括：

将样品与至少一种阻断剂、至少一种3'接头和至少一种第一连接酶组合以形成第一反应组合物，并在适于形成第一连接产物的条件下孵育，其中所述阻断剂在所述3'接头之前加入、与所述3'接头同时加入或在所述3'接头之后加入，并且其中在所述第一连接产物形成之前、与所述第一连接产物形成同时或在所述第一连接产物形成之后，将所述第一反应组合物在适于所述阻断剂与所述不需要的RNA退火的条件下孵育；

将包含所述第一连接产物的所述第一反应组合物与至少一种5'接头和至少一种第二连接酶组合以形成第二反应组合物，并在适于形成第二连接产物的条件下孵育；和

扩增所述第二连接产物以产生扩增产物库，其中对应于所述至少一种不需要的RNA种类的扩增产物被去除。

2.权利要求1的方法，其中所述扩增包括逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)。

3.权利要求1的方法，其中所述第一连接酶包括T4RNA连接酶2或截短的T4RNA连接酶2，并且所述第二连接酶包括T4RNA连接酶1或嗜热自养甲烷杆菌(Methanobacteriumthermoautotrophicum)RNA连接酶。

4.权利要求1的方法，其中所述第一连接酶包括T4RNA连接酶1，并且其中所述第一反应还包含ATP。

5.权利要求1的方法，其中所述阻断剂包含至少一种脱氧核糖核苷酸、至少一种核糖核苷酸、至少一种锁核酸(LNA)、至少一种2’o-甲基核苷酸、至少一种脱氧尿苷、至少一种肌苷，或它们的组合。

6.权利要求1的方法，其中所述阻断剂同与其退火的不需要的RNA相比更短、更长或长度相同。

7.权利要求1的方法，其中所述样品包含至少一种小RNA种类。

8.权利要求1的方法，其中所述扩增包括将至少一种寡核苷酸引物和至少一种逆转录酶加入到所述第二连接产物中以产生双链第二连接产物。

9.权利要求1的方法，其还包括按尺寸分离至少一些所述扩增产物。

10.权利要求1的方法，其中至少一种3'接头在其5’端包含活化的腺苷酰化(rApp)，在其3’端包含双脱氧核苷酸，或在其5’端包含rApp且在其3'端包含双脱氧核苷酸。

11.一种去除至少一种不需要的RNA种类的方法，其包括：

将样品与至少一种阻断剂、至少一种3'接头和至少一种第一连接酶组合以形成第一反应组合物，并在适于形成第一连接产物的条件下孵育，其中所述阻断剂在所述3'接头之前加入、与所述3'接头同时加入或在所述3'接头之后加入，并且其中在所述第一连接产物形成之前、与所述第一连接产物形成同时或在所述第一连接产物形成之后，将所述第一反应组合物在适于所述阻断剂与所述不需要的RNA退火的条件下孵育；

将所述第一连接产物与所述第一反应组合物分离；

将所述分离的第一连接产物与至少一种5'接头和至少一种第二连接酶组合以形成第二反应组合物，并在适于形成第二连接产物的条件下孵育；和

扩增所述第二连接产物以产生扩增产物库，其中对应于所述至少一种不需要的RNA种类的扩增产物被去除。

12.权利要求11的方法，其中所述扩增包括RT-PCR。

13.权利要求11的方法，其中所述第一连接酶包括T4RNA连接酶2或截短的T4RNA连接酶2，并且所述第二连接酶包括T4RNA连接酶1或嗜热自养甲烷杆菌RNA连接酶。

14.权利要求11的方法，其中所述第一连接酶包括T4RNA连接酶1，并且其中所述第一反应还包含ATP。