[发明专利]含肿瘤特异性溶瘤腺病毒和免疫检查点抑制剂的抗癌组合物

说明书

本发明涉及包含肿瘤特异性溶瘤腺病毒和免疫检查点抑制剂的抗癌组合物。根据本发明，插入了IL‑12和shVEGF或插入了IL‑12和GM‑CSF‑松弛素的重组腺病毒通过增强免疫功能而表现出优异的抗癌作用，这种抗癌作用已被证实通过与免疫检查点抑制剂相伴给药而显著增强，因此，本发明可用作癌症治疗领域的关键技术。

技术领域

本发明涉及包含肿瘤特异性溶瘤腺病毒和免疫检查点抑制剂的抗癌组合物。

背景技术

尽管癌症治疗剂的研发速度很快，癌症仍然是全球范围内高死亡率的疾病之一。临床常规使用的主要癌症治疗方法是手术，放射治疗，和抗癌剂治疗方法，或者，作为与其并行的治疗，最大程度地从患者中除去癌细胞的方法。然而，这些治疗仅在相对早期癌症未转移的状态下完全去除癌症细胞时才表现出治疗效果，它们也杀死正在快速分裂的其他正常细胞，因此具有可能引起各种副作用的缺点。相应地，最近已有人利用身体的肿瘤特异性免疫活性作为免疫治疗方法对癌症的治疗进行了研究。

然而，很难进行免疫治疗，因为癌症不仅具有巧妙地逃避和破坏各种宿主免疫反应的能力，结果通过诱导免疫抑制性肿瘤微环境而不断地维持肿瘤的存活，而且即使免疫系统被激活，也能够逃避激活的抗肿瘤免疫反应。因此，为了通过改善免疫抑制性肿瘤微环境来增强针对癌细胞的免疫应答，已经在各个方向上用下列物质进行了研究：细胞因子基因如IL-12，IL-18，干扰素-γ(IFN-γ)，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，共刺激因子如B7分子，直接作为抗原呈递细胞(APC)的树突细胞(DC)，由肿瘤抗原激活的T细胞，自然杀伤细胞(NKCs)等。具体地，IL-12通常由单核细胞、巨噬细胞和DC等APC分泌，已知它直接作用于细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和那些能够有效去除癌细胞的NK细胞，以激活那些细胞，诱导IFN-γ的分泌，增强杀死癌细胞的能力。此外，IL-12通过作用于幼稚型CD4+淋巴细胞，在促进分化为T辅助1(TH1)细胞中发挥重要作用，并因此通过诱导和增强细胞介导的免疫应答而激活抗癌免疫应答，这种细胞介导的免疫应答是抗癌免疫应答的一个关键因素。VEGF是由促进血管新生和血管形成的细胞产生的信号蛋白，它影响骨髓中的T细胞前体，从而不仅抑制T细胞和树突细胞的增殖和成熟，还在血管形成中起重要作用，由此表现出被称为癌症转移的副作用。因此，VEGF不仅是肿瘤生长的启动子，还充当抗癌免疫力中的抑制剂，预计通过VEGF shRNA下调VEGF可恢复免疫应答并增加抗癌作用。GM-CSF通过刺激DC以促进DC分化成APC来增强CD4+和CD8+T细胞的免疫应答，它还参与初始单核细胞中构成II类主要组织相容性复合体(MHC)的分子的表达调控。据报道，由于GM-CSF在肿瘤中表达，诱导了许多APC聚集在肿瘤周围以有效加工肿瘤抗原，由此诱导了强烈的抗癌免疫应答。

基于此，我们的实验室也报道了IL-12的抗肿瘤作用，是用YKL-1(Ad-E1B-55)作为E1B-55kDa基因缺失的肿瘤选择性溶瘤腺病毒，还报道了GM-CSF的抗肿瘤作用，是用RdB腺病毒，它比YKL-1具有更强的肿瘤选择性杀伤能力，这归因于E1B基因的缺失和E1A的Rb结合位点的修饰。尽管免疫抑制性肿瘤微环境得到改善，但因使用免疫治疗方法时肿瘤的低免疫原性，在完全治疗癌症方面仍存在许多限制。

发明内容

技术问题

在开发以克服肿瘤免疫监视逃避为目的的免疫疗法的深入研究中，本发明人不仅通过制备能同时表达它们的重组腺病毒，证实了IL-12加靶向血管内皮生长因子(VEGF)的短发卡核糖核酸(shVEGF)、或者IL-12加GM-CSF-松弛素的体内优秀抗癌效应，还证实通过与免疫检查点抑制剂共同给药改进了所述重组腺病毒的抗癌作用，由此完成了本发明。

因此，本发明的一个目的是提供能同时表达IL-12和shVEGF，或IL-12和GM-CSF-松弛素的重组腺病毒。

本发明另一目的是提供所述重组腺病毒在预防或治疗癌症中的用途。