[发明专利]使用抗体的靶标核酸浓缩和回收方法

说明书

本发明的目的是提供一种有效的核酸回收方法，该方法能够从含有核酸的样品中浓缩核酸，使得所述核酸可用于基因扩增反应。为了解决该问题，本发明人发现了通过靶向与核酸结合的蛋白质(下文中也称为核蛋白或蛋白质‑核酸复合物)而不是靶向核酸本身，或具体地，通过使针对蛋白质的特异性抗体起作用，可以与蛋白质同时捕获核酸，从而完成本发明。此外，本发明人已经发现，如果动物细胞、细菌、病毒等具有与细胞中(在病毒的情况下在包膜中)存在的蛋白质相结合的核酸，则在用表面活性剂处理细胞后，可以通过使用针对核蛋白的特异性抗体捕获并回收结合的核酸，而不将核酸从蛋白质中解离。

技术领域

本发明涉及从含有核酸的样品如生物样品中浓缩和回收靶核酸的技术。

背景技术

Boom方法(非专利文献1)作为从生物样品、细菌、病毒等中浓缩和回收核酸的方法而广泛应用。在该方法中，首先，在含有硫氰酸根离子、氯酸根离子等的离液盐的存在下，核酸与硅胶颗粒结合，然后，用约70％的醇水溶液(如乙醇水溶液和异丙醇水溶液)洗涤二氧化硅珠，以除去离液盐和污染物。随后，干燥二氧化硅珠以除去醇(例如乙醇和异丙醇)，然后可以用低浓度缓冲液或水分离和回收吸附在二氧化硅珠上的核酸。回收的核酸适用于基因扩增反应(PCR(聚合酶链反应)、LAMP(环介导的等温扩增)等)、与逆转录组合的基因扩增反应(逆转录PCR(RT-PCR)、使用逆转录酶的LAMP等)。

从人类生物样品(血液、尿液、组织等)中回收的核酸用于疾病诊断并且用作用于预测治疗剂效果的指标。例如，对于肺癌患者的EGFR(表皮生长因子受体)基因的突变检查是通过使用从肺癌组织中浓缩和回收的DNA以boom方法等进行，并且已经临床应用作为用于确定用酪氨酸激酶抑制剂治疗的效果的重要检查。通常，来自癌症患者的活组织检查即用于活检目的的一块组织的收集，是高度侵入性的。特别是对于易于复发的肺癌患者，经常需要活组织检查，但由于侵入性问题，在许多情况下很难进行活组织检查。作为替代，近年来还研究了回收和检查在血液中循环的DNA片段(ccfDNA；无循环细胞的DNA)的方法。已知真核生物染色体DNA包裹在组蛋白蛋白质周围，当由于细胞凋亡而发生细胞死亡时，DNA在未包裹在组蛋白周围的区域被破坏；因此，据报道，只有包裹在组蛋白周围的区域可以作为ccfDNA存在而不被破坏(非专利文献2)。该ccfDNA也可以通过应用boom方法作为DNA片段回收，并且已经出售了试剂盒(“QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit”，目录号55114，由Qiagen制造)。

用于传染病检查的细菌和病毒测试在临床上应用作为POC测试，例如使用针对细胞膜和细胞内蛋白质的特异性抗体的免疫层析法。其中，特别是对于流感感染，POC测试通常由于在感染早期缺乏灵敏度而导致假阴性，并且还开发了使用流感病毒RNA的高灵敏度检测系统。已知流感病毒RNA以螺旋方式包裹在包膜(envelope)内被称为NP蛋白的核蛋白周围，并且该RNA可通过利用boom方法的方法回收。

专利文献1公开了使用与细胞mRNA蛋白质(mRNP)复合物中包含的RNA结合蛋白或RNA缔合蛋白质相结合的配体、配体特异性的结合分子以及结合分子所附着的固体支持物来分离和表征内源性mRNP复合物的方法。

引用列表

专利文献

专利文献1：日本未审查专利申请公开No.2004-520002

非专利文献

非专利文献1：J.Clin.Microbiol.1990(28)495-503.

非专利文献2：Cell，2016(164)57-68.

发明概述

技术问题