[发明专利]具有降低的触角岩藻糖基化的重组糖蛋白

权利要求书

1.降低重组表达糖蛋白中复杂型N-聚糖的触角岩藻糖基化的方法，包括β-半乳糖苷α-2,6-唾液酸转移酶1(ST6Gal1)和/或α-2,3-唾液酸转移酶4(ST3Gal4)与糖蛋白一起过表达的步骤。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述糖蛋白的特征在于，与不过表达ST6Gal1和/或ST3Gal4的情况下表达的相同重组糖蛋白相比，复杂型N-聚糖的触角岩藻糖基化显著降低。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述重组表达糖蛋白的至少80％的所述复杂型N-聚糖触角未被岩藻糖基化。

4.如权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中所述糖蛋白选自α1-抗胰蛋白酶(AAT)、肝细胞生长因子(HGF)、因子VII(FVII)、因子VIII(FVIII)、因子IX(FIX)、vonWillebrand因子(vWF)、碱性磷酸酶和C1酯酶抑制剂(C1抑制剂；C1 INH)。

5.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其中所述糖蛋白是哺乳动物糖蛋白，优选人类糖蛋白。

6.如权利要求1至5中任一权利要求所述的方法，其中

(i)β-半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶1(ST3Gal1)未与糖蛋白一起过表达，和/或

(ii)α-1,3-甘露糖基-糖蛋白4-β-N-乙酰葡糖胺转移酶A(GnTIVa)、α-1,3-甘露糖基-糖蛋白4-β-N-乙酰葡糖胺转移酶B(GnTIVb)和α-1,6-甘露糖基糖蛋白6-β-N-乙酰葡糖胺转移酶A(GnTV)的表达未降低。

7.基因修饰以过表达β-半乳糖苷α-2,6-唾液酸转移酶1(ST6Gal1)和/或α-2,3-唾液酸转移酶4(ST3Gal4)的细胞系。

8.如权利要求7所述的细胞系，其中所述细胞系包含编码ST6Gal1和/或ST3Gal4的内源基因，并且还具有至少一基因元件，所述基因元件选自启动子、增强元件和稳定元件，所述启动子、增强元件和稳定元件插入基因组中适于引起ST6Gal1和/或ST3Gal4过表达的一个或多个位置。

9.如权利要求7或8所述的细胞系，其中所述细胞系包含编码ST6Gal1和/或ST3Gal4的外源核酸。

10.如权利要求7至9中任一权利要求所述的细胞系，其中所述细胞系选自细胞、Vero细胞、MDCK细胞、BHK细胞、CHO细胞、HEK293细胞、HepG2细胞、Huh7细胞、细胞、NC5T11细胞、Per.C6细胞、HMCLs细胞、MM.1细胞、U266细胞、RPMI18226细胞、HKB11细胞、NM细胞、NM-F9细胞和CAP细胞。

11.如权利要求7至9中任一权利要求所述的细胞系，其中所述细胞系源自人原代羊水细胞，所述原代羊水细胞包含至少一种编码腺病毒E1区和pIX区的所述基因产物的核酸。

12.如权利要求7至11中任一权利要求所述的细胞系，其中所述细胞系未被基因修饰以

(i)过表达β-半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶1(ST3Gal1)，和/或

(ii)降低α-1,3-甘露糖基-糖蛋白4-β-N-乙酰葡萄糖胺转移酶A(GnTIVa)、α-1,3-甘露糖基-糖蛋白4-β-N-乙酰葡萄糖胺转移酶B(GnTIVb)和α-1,6-甘露糖基糖蛋白6-β-N-乙酰葡萄糖胺转移酶A(GnTV)的表达。

13.具有复杂型N-聚糖的重组糖蛋白，其中所述复杂型N-聚糖的触角岩藻糖基化降低，使得所述重组糖蛋白的至少80％的复杂型N-聚糖触角未被岩藻糖基化。