[发明专利]包含阿维鲁单抗的组合物

说明书

本发明涉及具有提高了脱酰胺水平的阿维鲁单抗组合物，以及使用此类组合物治疗病症的方法，例如PD‑1与PD‑L1之间相互作用在其中有害的病症。

引言

本发明涉及具有提高了脱酰胺水平的阿维鲁单抗组合物，以及使用此类组合物治疗病症的方法，例如PD-1与PD-L1之间相互作用在其中有害的病症。

背景

大规模生产治疗性蛋白质得到的是异质的靶蛋白群。产生的蛋白质可以进行各种修饰，这些修饰根据具体修饰的性质会影响其生物学功能和稳定性。

天冬酰胺(Asn或N)残基的脱酰胺是在使用重组DNA技术生成治疗性蛋白质中最常见的翻译后修饰之一。在该反应中，Asn残基通过琥珀酰亚胺中间体(Asu)以约3:1的比例转化为异天冬氨酸(isoAsp或isoD)或天冬氨酸(Asp或D)(图1)。

Asn残基的脱酰胺的速率取决于多种因素，包括侧翼氨基酸、溶剂介电常数和溶剂粘度、温度、溶液pH和蛋白质的高级结构(Wakankar和Borchardt，Borchardt,J PharmSci.2006年11月；95(11):2321-36)。

已有多篇报道称Asn脱酰胺对抗体的结合亲和力有负面影响。

Harris等人表明，mAb赫赛汀(Herceptin)轻链(LC)CDR1中Asn30的脱酰胺使该抗体的结合效力降低至70％(J Chromatogr B Biomed Sci Appl.2001年3月10日；752(2):233-45)。

IgG1mAb的LC的CDR1环中的Asn残基(Asn33)脱酰胺使得抗原结合降低40-60％(Vlasak等，Anal Biochem.2009年9月15日；392(2):145-54)。

人源化重组IgG1mAb的另一个例子中，发现重链(HC)CDR2的Asn55易于脱酰胺成isoAsp和Asp，导致结合活性降低14倍(Huang等，Anal Chem.2005年3月1日；77(5):1432-9)。

还有报道称IgG1mAb的HC CDR2的Asn55处形成琥珀酰亚胺，导致效力降低70％(Yan等人，J Pharm Sci.2009年10月；98(10):3509-21)。

Yuang等人报道，IgG2抗体LC的Asn33脱酰胺与效力丧失相关，导致抗体40℃温育一个月后效力几乎完全丧失(MAbs.2013年9月-10月；5(5):787-94)。

鉴于脱酰胺对治疗性蛋白质结合亲和力的潜在危害，一直希望将这种翻译后修饰降至最低，并且已经开发出了在制造期间和之后保护蛋白质免于脱酰胺的方法(Gervais，JChem Technol Biotechnol 2016；91:569-575)。

例如，Kaneko等人记载了收获日影响mAb脱酰胺物质的量(J Biosci Bioeng.2010年3月；109(3):281-7)。该研究中，在不同收获日后用离子交换(IEX)色谱法分离不同的mAb变体。对应于mAb脱酰胺形式的峰值从第4天收获的1.06％升至第10天收获的7.71％。

该数据与Dengl等人的数据一致，进一步表明，例如pH和温度影响研究对象mAb的脱酰胺程度(Pharm Res.2013年5月；30(5):1380-99)。

还有报道称在哺乳动物细胞培养基中补充各种添加剂显着减少脱酰胺蛋白的积累(Hossler等，Biotechnol Prog.2015年7月-8月，31(4):1039-52；Brühlmann等，Biotechnol Prog.2015年5月-6月；31(3):615-29)。