[发明专利]细胞培养物中产生的抗体的总去岩藻糖基化糖型的控制

说明书

本文提供了调节由细胞培养物中的有糖基化能力的细胞产生的重组糖基化蛋白质的总去岩藻糖基化(TAF)糖型水平的方法。在示例性实施例中，这些方法包括将细胞培养物维持在初始设定点pH下持续初始细胞培养期。本文还提供了包含糖基化蛋白质及其TAF糖型的相关组合物。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年3月14日提交的美国临时专利申请号62/471,347的优先权，将其内容通过引用并入本文。

背景技术

糖基化是最常见但重要的翻译后修饰之一，因为它在多种细胞功能(包括例如蛋白质折叠、质量控制、分子运输和分选以及细胞表面受体相互作用)中起作用。糖基化影响重组蛋白药物的治疗功效，因为它影响治疗性糖蛋白的生物活性、药代动力学、免疫原性、溶解性和体内清除率。特别地，Fc糖型谱是重组抗体的重要产品质量属性，因为它们直接影响抗体的临床功效和药代动力学。

已经发现高甘露糖(HM)糖型含量影响某些治疗性抗体的药代动力学特性(Goetze等人,(2011)Glycobiology[糖生物学]21,949-59；Yu等人,(2012)MAbs 4,475-87)。HM糖型不仅影响抗体的血清清除率，而且除了去岩藻糖基化(afuco)糖型外的此类糖型还可以影响抗体效应子功能或抗体介导的靶细胞杀伤(也称为抗体相关细胞毒性(ADCC))。

许多因素影响聚糖结构，从而影响蛋白质的最终糖基化形式(糖型)。例如，表达抗体的细胞系、细胞培养基、进料培养基组成和细胞培养期间进料的时机可以影响蛋白质的糖型的产生。

虽然研究小组已经提出了许多方法来影响抗体特定糖型的水平，但是生物制药行业仍需要简单有效的方法来操纵和控制重组产生治疗性抗体期间总去岩藻糖基化(TAF)糖型水平。

发明内容

首次描述了如下数据，这些数据证明在初始细胞培养期(例如，接种后的前2、3、4、5或6天)期间维持所需初始pH(例如，初始设定点pH)对于调节重组产生的糖基化蛋白质的TAF糖型水平而言是重要的，而初始细胞培养期后的细胞培养物pH对TAF糖型水平的影响最小。初始pH而不是晚期pH影响TAF水平的发现是出乎意料的。不受特定理论的束缚，在初始细胞培养期(例如，接种后的前2、3、4、5或6天)期间控制初始pH(例如，初始设定点pH)允许重组产生具有所需或预定或预选水平的TAF糖型的糖基化蛋白质。因此，本发明涉及产生具有所需或预定或预选水平的TAF糖型的重组糖基化蛋白质(糖蛋白)的方法。

本发明提供了调节由细胞培养物中的有糖基化能力的细胞产生的重组糖基化蛋白质的TAF糖型水平的方法。在示例性实施例中，这些方法包括将细胞培养物维持在初始pH(例如，初始设定点pH)下持续初始细胞培养期。