[发明专利]RNA分子与肽的复合体的制造方法及其利用在审
申请号: | 201880018535.8 | 申请日: | 2018-03-15 |
公开(公告)号: | CN110637086A | 公开(公告)日: | 2019-12-31 |
发明(设计)人: | 上田泰己;清水义宏;原田颂子;松本桂彦 | 申请(专利权)人: | 珂璧斯塔斯株式会社 |
主分类号: | C12N15/09 | 分类号: | C12N15/09;C12N15/11;C12P21/02;C40B40/08 |
代理公司: | 11728 北京信诺创成知识产权代理有限公司 | 代理人: | 尹吉伟 |
地址: | 日本*** | 国省代码: | 日本;JP |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 复合体 核苷衍生物 翻译产物 模板DNA 反义链 末端侧 肽受体 修饰 连结 基因 | ||
1.一种RNA分子与肽的复合体的制造方法,其制造对肽进行编码的RNA分子、与编码于所述RNA分子中的肽的复合体,其特征在于包括:
步骤(i):其是通过包含启动子区域以及对位于其下游的肽进行编码的区域的DNA分子进行转录反应来制作RNA分子的步骤,且为在所述DNA分子的最下游的反义链的5'末端侧包含至少一个2'-修饰核苷衍生物的步骤;
步骤(ii):其是在步骤(i)中所获得的所述RNA分子的3'末端,使用夹板多核苷酸作为支架来结合肽受体分子的步骤;以及
步骤(iii):其是通过将步骤(ii)中所获得的结合有肽受体分子的所述RNA分子进行翻译,来制作所述RNA分子、与编码于所述RNA分子中的肽经由所述肽受体分子而连结的RNA分子与肽的复合体的步骤。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,
所述翻译是在实质上不包含核糖核酸酶的体外翻译系统中进行。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,
所述翻译是在实质上不包含对所述DNA分子具有活性的RNA聚合酶的体外翻译系统中进行。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其特征在于,
所述DNA分子包含连续的两个2'-修饰核苷衍生物。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其特征在于,
所述2'-修饰核苷衍生物为2'-O-甲基鸟苷。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其特征在于,
所述肽受体分子为嘌呤霉素。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法,其特征在于,
使用多个不同的所述DNA分子来制作多个不同的RNA分子与肽的所述复合体。
8.一种mRNA展示法,其包含根据权利要求1至7中任一项所述的方法,其特征在于,
包括步骤(iv),其从步骤(iii)中所获得的RNA分子与肽的复合体中选出所需的复合体。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,
将步骤(i)~步骤(iv)作为一个循环,反复进行多个循环。
10.一种DNA文库,其用于mRNA展示法,其特征在于,
包含多个不同的候选DNA分子,所述候选DNA分子包含启动子区域以及对位于其下游的候选肽进行编码的区域,且在最下游的反义链的5'末端侧包含至少一个2'-修饰核苷衍生物。
11.根据权利要求10所述的DNA文库,其特征在于,
包含1013个以上不同的候选DNA分子。
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