[发明专利]RNA分子与肽的复合体的制造方法及其利用

说明书

本发明提供一种高效地获得复合体的方法及其利用，所述复合体是将基因(mRNA)与作为其翻译产物的肽经由肽受体分子而连结。本发明的方法中，在模板DNA的反义链的5'末端侧导入至少一个2'‑修饰核苷衍生物。

技术领域

本发明涉及一种制造核糖核酸(ribonucleic acid，RNA)分子与编码于所述RNA分子中的肽的复合体的方法及其利用等。

背景技术

近年来，正在积极开展以抗体药物为代表的分子靶向药物的开发，其市场规模也不断扩大。但是，为了进一步的发展，谋求一种高效地筛选特异性、或对抗原的亲和性更高的“优质抗体”的方法。另外，尽管目前有许多原因不明的疑难病症或慢性疾病，但由于其原因调查未取得进展，故而也指出了“药物开发靶标枯竭”的问题。

与基因分析相比较，蛋白质的分析通常更困难。关于基因，已开发出聚合酶链反应(polymerase chain reaction method，PCR)法等多种基因扩增法，容易大量地制备试样，另一方面，关于蛋白质，不存在直接扩增的方法也是其原因之一。

因此，作为使蛋白质的分析变得更容易的方法的一例，已经开发出利用蛋白质、与对所述蛋白质进行编码的基因直接结合的复合体的方法。

例如，专利文献1及非专利文献1～2中公开了如下方法：使用将基因(信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid，mRNA))及作为其翻译产物的肽，经由嘌呤霉素(puromycin)而以共价键连结的复合体，来选择功能肽。更具体而言，通过在基因(mRNA)的3'末端侧，经由既定的连结体来连结嘌呤霉素，将所述基因进行翻译，由此，基因(mRNA)及作为其翻译产物的肽经由嘌呤霉素而连结。这些方法也称为mRNA展示法、或者体外病毒(Invitro virus)法等，是能够使用包含10¹³～10¹⁴个左右的所述复合体的非常大的文库的方法。另外，作为从所述方法派生出的方法，还开发出将mRNA转变为互补脱氧核糖核酸(complementary deoxyribonucleic acid，cDNA)后再使用的cDNA展示法、或可利用非天然氨基酸的RAPID展示等方法。

所述mRNA展示法中，基因(mRNA)与嘌呤霉素或嘌呤霉素的代替物(统称为肽受体分子或肽受体)的连结方法中已开发出若干方法。最初开发出mRNA展示法时，使用称为夹板DNA的DNA来作为支架的方法为主流。更具体而言，所述方法使包含肽受体分子的所述连结体、与所述基因(mRNA)的3'末端侧，相对于相同夹板DNA而杂交，将所述连结体与基因(mRNA)的3'末端侧进行酶促连接(非专利文献3等)。

但是，目前，作为基因(mRNA)与肽受体分子的连结方法，成为主流的是使用在一端具有与mRNA的3'末端侧的碱基序列配对的侧链碱基、且在另一端具有肽受体分子的连结体的方法(也参照专利文献2等)。在使用如上所述的连结体的情况下，所述连结体的所述一端与mRNA的3'末端侧的碱基序列进行杂交，继而，连结体的一端与mRNA的3'末端酶促连结而形成发夹(hairpin)结构。

[现有技术文献]

[专利文献]

[专利文献1]WO98/31700(1998年7月23日国际公开)

[专利文献2]WO2011/049157(2011年4月28日国际公开)

[非专利文献]