[发明专利]从水性混合物冷冻干燥的组合物及其制备方法

说明书

本发明涉及在含有山梨醇的组合物与另外的无定形糖的组合中配制腺病毒载体、其制剂以及获得干燥的组合物的方法。

本发明涉及配制冷冻干燥的组合物中的腺病毒载体、其制剂以及用于获得冷冻干燥的组合物的方法。

背景

腺病毒载体代表预防性或治疗性蛋白递送平台，通过其将编码预防性或治疗性蛋白的核酸序列整合入腺病毒基因组中，当将腺病毒颗粒施用于治疗的主体时，所述核酸序列被表达。在本领域中已经存在开发腺病毒载体的稳定制剂的挑战，所述稳定制剂允许在可接受的储存温度下以相当长的储存期限储存。

已经报道了人腺病毒载体的稳定制剂，诸如R.K Evans等人(‘Development ofstable Liquid Formulations for Adenovirus-Based Vaccines’ Journal of Pharmaceutical Sciences (2004) Vol. 93, No. 10, 2458-2475)所述。然而，本领域中仍然需要保留腺病毒载体的稳定性的制剂。

发明概述

本发明人令人惊讶地发现，在猿猴腺病毒载体的制剂中使用山梨醇实质上提高整个冷冻干燥过程中的稳定性，特别是与作为另外的冷冻保护剂的无定形糖海藻糖组合时。因此，本发明提供了用于冷冻干燥的水性混合物和通过冷冻干燥从所述水性混合物获得的冷冻干燥的组合物(下文称为“干燥的组合物”)，其包含山梨醇和充当冷冻保护剂的另外的无定形糖、诸如海藻糖的组合。

此外，已发现具有低盐含量对猿猴腺病毒载体颗粒的稳定性、尤其对在冷冻干燥期间和重构冻干饼后的稳定性具有进一步有利的影响。因此，本发明进一步提供了含有山梨醇和另外的无定形糖、还包含少量的NaCl的腺病毒组合物。本发明还提供了使用所述冷冻干燥的组合物的方法，通过其用低盐水性液体例如注射用水或非离子等张剂(isotonifying agent)的水溶液重构所述组合物。

本发明进一步提供了冻干所述腺病毒载体组合物的方法。

附图简述

图1 –如实施例1中所使用的冷冻干燥循环的说明。

图2 –如对于实施例1中测试的组合物所测定的玻璃化转变温度(Tg)：(1)包含海藻糖23%的组合物，(2)包含蔗糖23%的组合物，(3)包含海藻糖23% +山梨醇2%的组合物，(4)包含蔗糖23% +山梨醇2%的组合物。

图3 –如实施例1中获得的组合物中含有的腺病毒颗粒的感染性：(1)海藻糖23%(由(+)表示，(2)蔗糖23%(由X表示)，(3)海藻糖23% + 山梨醇2%(由(Y)表示，(4)蔗糖23%+山梨醇2%(由(Z)表示)和(5)新鲜纯化的本体对照(由直立三角形表示)和(6)降解的纯化的本体对照(由倒置三角形表示)。

图4 –如实施例2中所使用的冷冻干燥循环的说明。

图5 - 如实施例2中所测定的Tg。

图6 - 如实施例2中所测定的水分含量。

图7 - 如实施例2中所测定的重量摩尔渗透压浓度。

图8 - 如实施例2中所测定的PicoGreen数据。

图9 - 如实施例2中所测定的感染性。

图10 –如实施例2中所测定的超高效液相色谱(UPLC)回收率。

图11 - 如实施例2中对于鉴定优化的组合所确定的关于不同参数的数据的统计分析的说明(实验设计(DOE)图1)。