[发明专利]多转基因重组腺病毒

说明书

本发明提供了包含两个(或更多个)治疗性转基因例如CD80和CD137L的重组腺病毒。所述转基因优选被插入到E1b‑19K插入位点和/或E3插入位点中。

与相关申请的交叉引用

本申请要求2017年1月30日提交的美国临时专利申请系列号62/452,342和2017年6月16日提交的美国临时专利申请系列号62/520,945的利益和优先权。

技术领域

本发明的领域是分子生物学和病毒学，具体来说是表达两个或更多个治疗性转基因的修饰的病毒。

背景技术

尽管对引起癌症的潜在分子机制已有广泛了解，但大多数晚期癌症仍不能使用当前的化疗和放射疗法治愈。溶瘤病毒已成为具有显著增强当前用于各种不同恶性肿瘤的标准治疗的潜力的平台技术(Kumar，S.等，(2008)，CURRENT OPINION IN MOLECULARTHERAPEUTICS 10(4)：371-379；Kim，D.，(2001)，EXPERT OPINION ON BIOLOGICAL THERAPY1(3)：525-538；Kim D.(2000)ONCOGENE 19(56)：6660-6669)。已显示，这些病毒有希望作为不仅通过感染-繁殖-裂解的链式反应直接破坏恶性细胞，而且间接地诱导抗肿瘤免疫力的溶瘤剂。这些免疫刺激性质，通过在每次病毒复制时复制并表达的治疗性转基因的插入而被增强。

以前开发的溶瘤病毒包括被称为TAV-255的溶瘤性5血清型腺病毒(Ad5)，其在正常细胞中被转录弱化但在癌细胞中有转录活性(参见PCT公布号W02010/101921)。据信TAV-255载体实现这种肿瘤选择性的机制是通过用于转录因子Pea3和E2F的三个转录因子(TF)结合位点的靶向缺失，所述转录因子是通过结合到特定DNA序列来调控病毒进入宿主细胞后将会转录的最早基因E1a的腺病毒表达的蛋白质。

尽管到目前为止已作出尝试，但对用于在人类患者中治疗癌症和过度增殖性障碍的改进的溶瘤病毒，仍存在需求。

发明内容

本发明部分是基于下述发现，即腺病毒例如溶瘤病毒出人意料地可以在不使用外源启动子的情况下高效表达插入到特定插入位点中的多个(两个或更多个)治疗性转基因，并且所述病毒可以无视并入到病毒基因组中的转基因的大小，复制并高效表达所述两个或更多个治疗性转基因。

因此，一方面，本发明提供了一种重组腺病毒，其包含：(a)编码第一治疗性转基因的第一核苷酸序列，其被插入到E1b-19K插入位点中，其中所述E1b-19K插入位点位于E1b-19K的起始位点与E1b-55K的起始位点之间：和(b)编码第二治疗性转基因的第二核苷酸序列，其被插入到E3插入位点中，其中所述E3插入位点位于pVIII的终止位点与Fiber的起始位点之间。

在某些实施方式中，所述重组腺病毒是5型腺病毒(Ad5)。