[发明专利]凝血因子VIII模拟蛋白及其用途

说明书

本公开提供了凝血因子VIII(FVIII)模拟蛋白。该FVIII模拟蛋白包含(1)凝血因子IX(FIX/FIXa)结合结构域，其包含第一重链可变区(V_H1)和第一轻链可变区(V_L1)，其中所述V_H1和所述V_L1衍生自与FIX/FIXa特异性结合的抗体；(2)凝血因子X(FX)结合结构域，其包含第二重链可变区(V_H2)和第二轻链可变区(V_L2)，其中所述V_H2和所述V_L2衍生自与FX特异结合的抗体；和(3)膜结合结构域。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年2月6日提交的美国临时专利申请号62/455,029的优先权，其公开内容通过引用并入本文。

发明领域

本发明总体上涉及用于治疗血友病的组合物和方法。

背景技术

血友病A是由凝血因子VIII(FVIII)的遗传缺陷引起的出血率增加。FVIII在肝窦细胞和内皮细胞中产生，以无活性的形式在血液中循环，与血管性血友病因子(vonWillebrand factor)结合，直到发生损害血管的损伤。作为对损伤的响应，FVIII被激活并与血管性血友病因子分离，与因子IXa相互作用，并在凝血级联反应中激活因子X。在不与血管性血友病因子结合的情况下，激活的FVIII被蛋白水解降解并迅速从血流中清除。

目前对血友病A的治疗通常限于FVIII的施用。FVIII在血液中的半衰期约为12至16小时。因此，经常需要定期或连续静脉内施用重组FVIII，以治疗血友病A或预防出血。因此，强烈需要比使用FVIII具有更少负担的治疗组合物或方法。

最近，已经探索了用于治疗血友病A的新方法，包括使用功能上替代FVIII的双特异性抗体(参见例如，Toyoyuki Igawa等人的US20130330345A1)和基因疗法，以将功能性FVIII基因引入患者(参见例如，Nienhuis AW等人,Hum Gene Ther.2016 27(4):305-8))。然而，鉴于所面临的技术难题，这些方法的治疗效果仍待确认。例如，双特异性抗体可能会影响FIX、FIXa或FX的半衰期，双特异性抗体的潜能可能由于无法与血小板膜相互作用而受限，以及FVIII基因的大小(超过7kb的cDNA)已经成为血友病A基因疗法的主要障碍。因此，持续需要开发用于治疗血友病A的新的组合物和方法。

发明内容

在一方面，本公开提供了凝血因子VIII(FVIII)模拟蛋白。在一个实施方案中，FVIII模拟蛋白包含(1)凝血因子IX(FIX/FIXa)结合结构域，所述FIX/FIXa结合结构域包含第一重链可变区(V_H1)和第一轻链可变区(V_L1)，其中所述V_H1和所述V_L1衍生自与FIX/FIXa特异性结合的抗体；和(2)凝血因子X(FX)结合结构域，所述FX结合结构域包含第二重链可变区(V_H2)和第二轻链可变区(V_L2)，其中所述V_H2和所述V_L2衍生自与FX特异性结合的抗体。

在一些实施方案中，FVIII模拟蛋白的FIX/FIXa结合结构域和/或FX结合结构域具有单链片段可变结构域的形式。在这种情况下，V_H1和V_L1和/或V_H2和V_L2包含在单个多肽中，并通过接头连接。在一个实施方案中，FVIII模拟蛋白包含有包含FIX/FIXa结合结构域和FX结合结构域的单个多肽，即FIX/FIXa结合结构域和FX结合结构域通过接头连接。

在一些实施方案中，FVIII模拟蛋白具有Fab片段、F(ab’)₂片段或Fv片段的形式。